CD28細胞内シグナル活性化によるポドサイト傷害機序の解明

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25461624
• Research Institution: University of Miyazaki
• Principal Investigator: 此元 隆雄 宮崎大学, 医学部, 助教 (80315366)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 福田 顕弘 宮崎大学, 医学部, 医員 (30628889) ; 藤元 昭一 宮崎大学, 医学部, 教授 (80173467)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: ポドサイト / アポトーシス / 酸化ストレス

Outline of Annual Research Achievements

ネフローゼ症候群に代表されるタンパク尿をきたす疾患において、糸球体上皮細胞（ポドサイト）が傷害され糸球体濾過障壁の破綻が起こることが知られている。また、その際にポドサイトにおいてCD80蛋白の発現が亢進する。我々は、ポドサイト細胞株を用いて、ポドサイト傷害機序におけるCD80/CD28シグナル伝達の影響を検討している。ポドサイト細胞株においても、種々の刺激（polyI;C, Puromycin, 活性酸素）によってCD80 mRNAの発現亢進をリアルタイムPCRによって確認した。また、免疫沈降法によってCD80とCD28が結合していることを確認した。次に、ポドサイト傷害におけるアポトーシスの関与を明らかにするために、PAN刺激を用いて検討を行った。PAN投与によって、細胞死が増加し、フローサイトメトリーによる検討でアポトーシスが関与していることを確認した。アポトーシスに関連する主要な分子のmRNA発現をリアルタイムPCRで検討したが、有意に増加しているものを同定することはできなかった。そこで、酸化ストレスの影響を活性酸素の蛍光染色、フローサイトメトリーによって確認したところ、細胞内活性酸素の増加が認められた。また、LC3のウエスタンブロットでLC3-Ⅱの増加を認め、ポドサイト傷害時にかアートファジーが防御的に働いてる可能性が考えられた。これらの機序におけるCD80/CD28シグナル伝達の影響を見るために、PAN刺激によるCD28発現の変化をリアルタイムPCR、フローサイトメトリーによって検討を行ったが、CD28のmRNA及びタンパクに有意な変化は確認できなかった。
ポドサイト傷害時には、酸化ストレスやオートファジーが関与していることが確認できたが、CD80/CD28シグナル伝達との関連を明らかにすることができなかった。今回の検討では、CD80タンパク発現増加がポドサイト傷害にどのように関わっているか、明らかにすることができなかった。