TLR7アプタマーによる内因性Denger Signalの制御と新規治療法の開発

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25462049
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 上原 圭介 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院講師 (50467320)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 梛野 正人 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20237564) ; 吉岡 裕一郎 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (50597854) [Withdrawn] ; 國料 俊男 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任講師 (60378023) ; 横山 幸浩 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (80378091)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: Danger signal

Outline of Annual Research Achievements

胆管癌皮下発癌モデルにTLR7 アゴニストであるイミキモドを投与し、その抗腫瘍効果を検討した。生食投与群において腫瘍の縮小は認めなかったが、イミキモド投与群において明らかな腫瘍の縮小を認め、この切除標本を用いてTLR7の関連分子としてMyd88、IRF (Interferon regulatory factor)ファミリーの発現についてリアルタイムPCR、ウェスタンブロティングによる解析をおこなった。
TLR7 を標的にしたsiRNAによる機能解析：TLR7 を標的にしたsiRNAを胆管癌細胞株に導入し増殖能（MTT アッセイ法）の検討を行った。また膵癌細胞株に関してもTLR7 を標的にしたsiRNAを導入し、増殖能（MTT アッセイ法） 、浸潤能（インベーションアッセイ法） 、アポトーシス（TUNEL 法）について検討した。
TLR7 アゴニストであるイミキモドを胆管癌細胞株、膵癌細胞株に投与し、増殖能（MTT アッセイ法） 、浸潤能（インベーションアッセイ法） 、アポトーシス（TUNEL 法）、運動能（スクラッチアッセイ）、足場依存性増殖（コロニーフォーメーションアッセイ）などの機能解析を継続した。
他のTLRファミリーであるTLR4のアゴニストをラット炎症モデルへ投与し、免疫誘導に関してIL6、TNFaの発現をリアルタイムPCRにて検討した。炎症により発現亢進したIL6、TNFaはTLR4のアゴニストによりその発現は低下した。同様にTLR4のアゴニストをラット炎症モデルへ投与した際のIL6、TNFaの発現をELISA法にて検討した。