2013 Fiscal Year Research-status Report
肝再生・肝線維化における新規血小板活性化受容体ＣＬＥＣ－２の役割に関する検討
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25462083
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| Research Institution | University of Yamanashi |
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Principal Investigator |
雨宮 秀武 山梨大学, 医学部附属病院, 助教 (70377547)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河野 寛 山梨大学, 医学工学総合研究部, 助教 (40322127)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | CLEC-2 / 肝切除後肝再生 / 血小板 / 肝類洞壁細胞 |
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| Research Abstract |
目的：活性化血小板（PLT）は肝再生に関与する。一方、近年発見されPLTや肝類洞内皮に発現するとされるPLT活性化新規受容体c-type lectin-like receptor 2 (CLEC-2)の、肝再生における役割の詳細は不明である。今回、CLEC-2の肝切除後肝再生におる役割を検討した。
方法：胎生致死である1.CLEC-2欠損ノックアウトマウス、ならびに2.多核球-PLT系CLEC-2欠損コンディショナルノックアウトマウスの造血幹細胞を含む胎仔肝細胞を、放射線照射後に移植したCLEC-2欠損骨髄キメラマウスモデル（1.KO、2.flox/flox KO）を作成した。Wild-type（WT）キメラマウスは、C57BL/6N マウス骨髄を照射後に移植した。70%肝切除（Hpx）を施行し、肝体重比、Ki67とPCNA発現を検討した。肝CyclinD1、HGF、TNF-αとIL-6 mRNA発現を検討した。さらに、STAT3、Akt、ERK1/2発現を検討した。
結果： WT群ではHpx後の肝体重比は漸増し、7日目にHpx前値にまで回復した。KO群ならびにflox/flox KO群は肝再生有意に遅延し、Ki67ならびにPCNA発現も有意に減少した。TNF-αならびにIL-6 mRNA発現はWT群において有意に増加し、flox/flox KO群では有意に低下した。p Aktならびにp ERK1/2はWT群においてHpx後に有意に発現が増加、また、flox/flox KO群においても増加を認め両群間で有意差を認めなかった。一方、STAT3発現はWT群と比較しflox/flox KO群で有意に低下した。
考察：CLEC-2は肝再生に関与していた。内皮細胞とPLTの相関による肝再生シグナルカスケード（STAT3系）が活性化していた結果より、CLEC-2の肝類洞内皮とPLTの相関による肝再生への関与を強く示唆していた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成25年度に計画していた検討事項は、約80％終了できている。
1.CLEC-2の肝内での発現の検討
ヒトにおいては、肝類洞内皮細胞でのCLEC-2のligandであるpodoplanin発現が確認できている。また、マウスでは、上記の肝類洞内皮細胞に加えて肝細胞での発現を認めている。
2.部分肝切除後肝再生におけるCLEC-2の役割の解明：
LEC-2は肝再生に関与していた。内皮細胞とPLTの相関による肝再生シグナルカスケード（STAT3系）が活性化していた結果より、CLEC-2の肝類洞内皮とPLTの相関による肝再生への関与を強く示唆していた。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成25年度の残された検討予定項目を全て終了させる。
また、平成26年度の検討項目である硬変に至る肝線維化発症機序におけるCLEC-2の役割、肝障害・肝線維化後の肝再生におけるCLEC-2の役割の解明に関する検討を開始する。
さらに、平成25年度の検討結果より、肝切除後の肝再生における血小板と肝類洞内皮の相互作用によるシグナルカスケードに血小板上に発現するCLEC-2受容体と、肝類洞内皮細胞上に発現するligandであるpodoplaninが関与している可能性がある点に関し検討を追加する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
平成25年度は、試薬、抗体等が定価より安価で購入できたため未使用金が生じた。
RT-PCR法及びWestern blotting法によるサイトカインのmRNA発現、ELISA法による産生量の比較に必要な抗体、試薬等を平成25年度の未使用金と合わせて購入予定である。
また、検討に必要なマウスおよび不足しているディスポーザブル用品も購入予定である。
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