2013 Fiscal Year Research-status Report
糖鎖連結クロリンを用いた新しい光線力学的療法による胆管癌の次世代局所治療法の開発
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25462120
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
七島 篤志 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (60380838)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
阿保 貴章 長崎大学, 大学病院, 助教 (70404267)
永安 武 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (80284686)
磯本 一 長崎大学, 大学病院, 准教授 (90322304)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 糖鎖連結クロリン / 光線力学療法 / 胆道癌 / 膵癌 |
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| Research Abstract |
糖鎖連結クロリンを用いた胆道癌（NOZ）に対する光線力学療法の基礎研究に行うにあたり、まず照射条件の設定を行った。糖鎖連結クロリンの細胞毒性は1～20ug/mlにおいて薬剤添加4時間後にMTS asseyを行い評価したところ、17ug/ml以上の濃度では細胞毒性を認めたため、それ以下の濃度で実験を行うこととした。次に1～11ug/mlまでの濃度で光照射（660nm）を行い24時間後にMTS asseyを行ったところ、濃度依存性に殺細胞効果が認められた。
次にIC50（照射量：５J）での比較においては、糖鎖連結クロリンにおいて約4分の1の濃度でIC50が得られた。（糖鎖連結クロリン：1.16uM,レザフィリン：5.17uM）
また、IC50の濃度でのPDT後にannexin V、エチジウムホモダイマーIIIを用いて蛍光染色を行ったところ、PDTによる細胞死がアポトーシスによることがわかった。この蛍光色素を用いて染色しフローサイトメトリーを行ったところ、糖鎖連結クロリンPDTの方がアポトーシス誘導効果が高いことが確認された。また、経時的にみてもアポトーシス細胞が徐々に増加していることが認められた。
膵癌細胞（Mia-pa-ca）における条件設定では、糖鎖連結クロリンの細胞毒性は1～11 ug/mlにおいて薬剤添加4時間後にMTS asseyを行い評価したところ、細胞毒性は認められなかった。次に、1～11ug/mlまでの濃度で光照射（660nm）を行い24時間後にMTS asseyを行ったところ、濃度依存性に殺細胞効果が認められた。次にIC50（照射量：2J）での比較においては、糖鎖連結クロリンにおいて約10分の1の濃度でIC50が得られた。（糖鎖連結クロリン：0.95uM,レザフィリン：10.95uM）
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
胆道癌細胞株（NOZ）に対する糖鎖連結クロリンによるPDTの効果をレザフィリンと比較検討する実験において、in vitroでの実験がほぼ終わり、in vivoでの実験に移行している。（NOZ細胞株をヌードマウスの皮下に移植した。）
in vitroの実験においてはアポトーシスの証明に現在はアネキシンVの蛍光染色にておこなっており、今後はPI染色を用いて細胞周期の解析をおこなう。また、電気泳動によりDNAラダーの検出を行いアポトーシスを証明する。
膵癌細胞株（Mia-pa-ca）の実験も並行して勧めておりin vitroで行う実験の半分ほど終了している。（細胞毒性、IC50の比較）
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| Strategy for Future Research Activity |
in vitroにおいては、NOZ細胞に対し糖鎖連結クロリンによるPDTを行い、その細胞からDNAを抽出し電気泳動によってDNAラダーを確認しアポトーシスを証明する。また、TUNEL法によってアポトーシスの確認を行う。
in vitroの結果をうけてin vivoにおいて、ヌードマウスの背部にNOZ細胞を皮下移植し、糖鎖連結クロリンPDTを行い、腫瘍増殖抑制効果をレザフィリンPDTと比較検討する。また、PCNA染色やVEGF染色を行い評価検討する予定。
膵癌細胞株の実験においてはIC50の比較、annexin V、エチジウムホモダイマーIIIを用いて蛍光染色を行いアポトーシス誘導率の比較、DNAラダーの検出を行い、in vivoでの実験に移行する。
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