2013 Fiscal Year Research-status Report
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25462271
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
山田 和慶 熊本大学, 医学部附属病院, 教授 (00398215)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
倉津 純一 熊本大学, 大学院生命科学研究部, 教授 (20145296)
篠島 直樹 熊本大学, 医学部附属病院, その他 (50648269)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 悪性神経膠腫瘍 / 電場変容 / パルス電流 / ヌードマウス |
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| Research Abstract |
本研究は、悪性神経膠腫の新しい治療モダリティーとして注目されている電場変容手段に着目し、腫瘍内に直接挿入した刺激電極よりパルス電流を与え、様々な刺激パラメータやパターンによる治療効果を、実験動物 (マウス) を用いて検討するものである。この研究の成果を踏まえて、将来的には、運動異常症に対する脳深部刺激療法 (Deep Brain Stimulation; DBS) と類似の手段により、脳幹など脳深部に位置する神経膠芽 (glioblastoma; GBM) 治療への臨床応用を構想している。
1)ヒト由来悪性神経膠腫 cell line の確立；K10025 anaplastic oligoastrocytoma, primary culture cell line を、以下の条件下で確立させた。Media: DMEM F-12 HAM+ penicillin, streptomycin, and amphotericin B + Gluta-Max + B-27 サプリメント + N2 サプリメント + インスリン + ヘパリン + Leukemia inhibitory factor +EGF + bFGF, at 5% CO2, 37℃。
2) 短期増大皮下腫瘍モデルの確立；ヌードマウス (CD1-Foxn1nu) の背部皮下に、上記ヒト由来悪性神経膠腫培養細胞 (1x106 cells) を注入し、1ケ月間で直径2cmに増殖する短期増大皮下腫瘍モデルを確立した。
3) 腫瘍内電極による電気刺激実験；腫瘍表面の皮膚に小切開を設け、DBS電極 (モデル 3389-28, メドトロニック社製)を腫瘍に挿入し、DBS装置 (エクスターナルシステム3702,メドトロニック社製）によって、2(+)3(-)の双極一回刺激 (60分) を、刺激幅: 450 μsec、刺激頻度: 130 Hz、刺激強度: 5 V の条件で行った。
4) 組織学的検討；刺激後2-3日で、皮下腫瘍を摘出し、ホルマリン固定・パラフィン包埋後、3μmの切片を作成し、H-E染色に加え、MIB-1 および TUNEL 染色を加え、刺激部 (contact 2 および 3 周囲) と非刺激部 (contact 0 および 1 周囲)の組織学的差異を検討している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
平成25年度には、上記成果に加え、様々な電気刺激パラメータによる、一回刺激および 反復間欠刺激を行う予定であった。
また現在解析中の組織学変化の結果を出す予定であったが、モデル確立に時間を要し、これが達成できなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成26年度は、パラメータを変化させた、電気刺激を行う。これを踏まえて、以下の検討を行う。
I)腫瘍に対する電気刺激の組織化学的検討（H-E染色、MIB-1およびTUNELにより、細胞分裂およびアポトーシスの状態について検討と電気刺激による特異的変化を見出す。）
II)皮下腫瘍の電気刺激の治療効果の検討 (腫瘍サイズの変化、個体生存期間の検討）
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
実験進展がやや遅れ、サーモグラフィーを使用する段階に至らなかった。これを購入しなかったため、次年度に繰り越しとした。
サーモグラフィーを購入し、電気刺激による温度変化の有無について検討する予定である。
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