2015 Fiscal Year Annual Research Report
正常遺伝子型の先天色覚異常におけるL/M視物質の遺伝子の解析と発現誘導
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25462711
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| Research Institution | Shiga University of Medical Science |
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Principal Investigator |
上山 久雄 滋賀医科大学, 医学部, 准教授 (30127013)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村木 早苗 滋賀医科大学, 医学部, 講師 (90335175)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | opsin / color vision / mutation / gene / splicing |
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| Outline of Annual Research Achievements |
この３年間に蓄積した51例では、正常なL-Mの遺伝子の並びを持つ例が計6存在した。
正常な遺伝子の並びを持つ1型2色覚2例のうち1例は－99T>Gの塩基置換、他の1例はイントロン2に+3A>Cの塩基置換（いずれも新規）を持っていた。－99Tは、PCE-1を構成している塩基であった。+3A>Cでは、コドン115～137が抜けたmRNAのみが作られることが分かった。
2型3色覚524例中の62例（今回の4例を含む）において－71A>Cが見出された。L/M錐体の分化には甲状腺ホルモン（T3）が必須である。そこで、－71Aあるいは－71Cのプロモーターを挿入したレポータープラスミドを培養細胞にトランスフェクトし、T3を添加してルシフェラーゼ活性を測定した。－71AではT3添加により活性が上昇したが、－71Cでは全く効果が見られなかった。2型3色覚の中に、少数のM錐体、あるいは視物質の濃度が低いM錐体によるものが存在する可能性が示唆された。
エキソン3の特殊なハプロタイプにより、当該エキソンがスプライシングにおいて完全にスキップされる。スプライシングにおいて保持されるエキソン3をOKエキソン3、スキップされるものをNGエキソン3とした。LオプシンのcDNAにNGエキソン3を挿入しGFPベクターにクローニングした。光る細胞が出現するかどうかでスクリーニングを行った。コルセミドを添加すると光る細胞が出現することが分かった。
エキソン認識に重要なSRタンパク質、イントロン認識に重要なhnRNPタンパク質のcDNAを発現ベクターにクローニングし、それらを発現した細胞からの抽出液を用いて解析した。OKエキソン3のRNAにのみSR1とSR3が結合可能であった。一方、hnRNPタンパク質は、F、H1あるいはH2がNGエキソン3のRNAにのみ結合できることが分かった。
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[Journal Article] Novel mutations in the gene for α-subunit of retinal cone cyclic nucleotide-gated channels in a Japanese patient with congenital achromatopsia2016
Author(s)
Kuniyoshi K, Muraki-Oda S, Ueyama H, Toyoda F, Sakuramoto H, Ogita H, Irifune M, Yamamoto S, Nakao A, Tsunoda K, Iwata T, Ohji M, Shimomura Y
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Journal Title
Jpn J Ophthalmol
Volume: 60
Pages: 187-197
DOI
Peer Reviewed
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