2013 Fiscal Year Research-status Report
TGFβシグナルのTRPによる調節を標的とした眼線維化疾患の新規治療戦略の確立
| Project/Area Number |
25462729
|
|---|
| Research Institution | Wakayama Medical University |
|---|
Principal Investigator |
雑賀 司珠也 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (40254544)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
住岡 孝吉 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (40433362)
山中 修 和歌山県立医科大学, 医学部, 准教授 (50254545)
岡田 由香 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (50264891)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | TGFβシグナル / Smad / MAPキナーゼ / 眼 / 線維芽細胞 / 炎症 / 瘢痕 / 線維化 |
|---|
| Research Abstract |
TRP（transient receptor potential）イオンチャンネルスーパーファミリーによるトランスフォーミング成長因子ベータ（TGFβ）シグナルの調節とそれを介した創傷治癒、組織線維化に関連する遺伝子発現制御の機序解明を，第一段階の目的とした。そのクロストークを標的とした眼線維化疾患の新規治療戦略の確立を最終目的とする。培養線維芽細胞で、TRPA1欠損の眼由来線維芽細胞でTGFβ1刺激後のSmad3分子C末端とp38のリン酸化が著しく減弱する事を予備的に見いだしていたが、これを確認すると同時に他のMAPキナーゼ系の活性化を抑制することも確認できた。TRPA1阻害薬HC-030031を野生型の細胞培養に添加することで再現できた。この現象は、TRPV4欠損線維芽細胞でも検出された。結膜切開瘢痕モデルをTRPV1-KOマウスに作成すると、免疫組織化学的検索において、炎症細胞の侵入やフィブロネクチンの沈着が野生型マウスにおいてよりも、原弱している傾向にあった。阻害薬HC-030031の腹腔内もしくは局所投与の効果の検討が必須であることが判明した。in vitroでのTGFβシグナルの原弱が、in vivo結膜での炎症抑制、瘢痕抑制に繋がる可能性が強く示唆された。他の手法での追求を今後の検討に委ねたい．さらには、治療法の開発の前段階として、今後は、保有している他のTRPファミリー遺伝子の欠損マウスでも同様の研究を展開したい。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画にって、養線維芽細胞で、TRPA1欠損の眼由来線維芽細胞でTGFβ1刺激後のSmad3分子C末端と他のMAPキナーゼ系の活性化を抑制することが確認でき，さらには、TRPA1阻害薬HC-030031を野生型の細胞培養に添加することで再現できた。同様の事がTRPV4欠損線維芽細胞でも検出された。これらのin viyroの成果は当初の計画内のことで、評価できる。一方で in vitro研究では、マクロファージでのシグナル伝達評価が今後の課題となった。in vivo研究では、計画通り、結膜切開瘢痕モデルをTRPV1-KOマウスに作成すると、免疫組織化学的検索において、炎症細胞の侵入やフィブロネクチンの沈着が野生型マウスにおいてよりも、原弱している傾向にあルコとが示唆された。今後は、他の手法での追求を今後の検討に委ねたい．計画以上の進行は得られなかった。これは、阻害薬でのin vivo研究と他のTRPファミリー遺伝子の欠損マウスでの研究までは進めなかったからである。
|
| Strategy for Future Research Activity |
TRPA1およびTRPV4欠損のマクロファージとPMNでTGFβ1刺激後のSmad3分子C末端と他のMAPキナーゼ系のシグナル伝達評価が今後の課題である。in vivo研究では、結膜切開瘢痕モデルをTRPV1-KOマウスで免疫組織化学で示唆された結膜瘢痕抑制効果を他の手法（Western blot、real-timeRT-PCRなど）で詳細に評価しなければならない。さらには、阻害薬HC-030031の腹腔内もしくは局所投与の効果の検討が必須である。その後、一方では他のファミリー遺伝子欠損マウスでの研究に拡大させると同時に、計画に盛り込まれている増殖硝子体網膜症モデルでの同様の評価をARPE-19細胞での阻害薬の効果検討と平行して開始しなければならない。
|
| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
次年度に旅費を支出する必要ができたため
旅費に使用する。
|
