短期的電気刺激による神経再生促進の検討と糖尿病マウスへの応用について

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25462803
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 名取 悠平 順天堂大学, 医学部, 非常勤助手 (80445478)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 林 礼人 順天堂大学, 医学部, 准教授 (10365645) ; 水野 博司 順天堂大学, 医学部, 教授 (80343606)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 短期的電気刺激 / 末梢神経障害 / live imaging / transgenic mouse / peripheral nerve

Outline of Annual Research Achievements

昨年度検証したlive imagingの有用性を生かし端側神経モデルの経時的な変化と形態学的評価を行った。
方法：シュワン細胞がproliferationするとGFP発色するNestin-GFP mice及びC57BL/6J　miceを用いた。C57BL/6J　miceから坐骨神経2cm採取し抗原性を持たないようCold preservation処置をし、その後Nestin-GFP miceの坐骨神経に4群に分けて移植した。
グループ１はコントロール群として両側を筋肉内に埋入した。　グループ２は片側の無損傷な端側神経縫合群とし、二分割してDonor神経を挟み込みように接合され、他端は筋肉内に埋入した。　グループ３は片側の神経上膜開窓及び神経線維部分切断群で、Donor神経の上膜を開窓し横断面に1/5程度の軸索断裂を加えて端側縫合し他端は筋肉内に埋入した。　グループ４はグループ３と同じ端側神経縫合法を移植神経両側端に施行した。　評価方法は蛍光実態顕微鏡下にシュワン細胞をlive imagingで７日毎に経時的に観察した。神経移植4週後の移植神経を全てをwhole mount imagingで観察しシュワン細胞の遊走距離を測定した。
結果：Live ではグループ１ではシュワン細胞は遊走が確認できず、グループ２では僅かに遊走を認め、グループ３．４では移植２週目からほぼ正比例に遊走を認めた。
移植後４週のWhole mount imagingではグループ１では遊走シュワン細胞を認めずグループ２では縫合近傍部に少数認めるのみであり、グループ３では移植神経の約2/3程度まで認め、グループ４では移植神経全体にシュワン細胞を認めた

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

免疫染色やPCR法などを用いた評価が充分に行えておらず、多角的な検討が必要である。

Strategy for Future Research Activity

昨年用いられた結果を踏まえ、組織学的評価を加えると共に短期的電気刺激の有用性を検討していく予定である。

Causes of Carryover

当初予定していた免疫染色、PCR法での評価が行えなかった為

Expenditure Plan for Carryover Budget

早期に検体採取と共に、上記評価を行う