2015 Fiscal Year Research-status Report
低酸素再酸素化ストレスが血管内皮細胞機能に及ぼす影響
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25462819
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
小幡 由佳子 浜松医科大学, 医学部附属病院, 助教 (90432210)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 虚血再灌流 / 低酸素 / 血管内皮 / エネルギー枯渇 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
血管内皮は炎症や虚血再灌流障害の際に臓器と同様に重要な役割を果たし、様々なシグナル伝達を介してメディエータとして働いていることがわかっている。生体内では血管内に血液が流れることによってシェアーストレスがかかり血管内皮が様々な反応を起こしている。このため灌流を行った状態での各種の反応を捉えることを最終的な目標としているが実験設備を整えることに多額の費用がかかり現時点では困難である。当初の計画では血管内皮を低酸素、灌流状態に置いた後で再灌流し、その際の血管内皮の細胞機能や活性酸素の定量、細胞内シグナルの変化を測定する予定であった。しかし我々の施設に現在ある装置では完全な低酸素を実現するのが困難であり現在模擬的（化学的）虚血状態（エネルギー枯渇状態）を作り、静止モデルで細胞機能を測定している。現在までに科学的な虚血再灌流後のブラジキニンによる細胞刺激で細胞内カルシウム濃度の変化を測定しているが、この点については機能が完全に失われるわけではなく、反応の程度が小さくなる傾向があることが観察されている。小胞体のCa2+ATPase阻害薬であるサプシガーゲンでの刺激でも同様の結果が得られている。虚血再灌流障害の際にカルシウムが重要な役割を果たすことが予想されるが、詳細は未だ不明である。また、その他の細胞から産生される物質（Nitric Oxide、PGI2）については現在測定中であり、これらについてはまだ結果を報告するに至らない。
来年度は引き続きこれらを測定し、まだ開始していない活性酸素の定量、更に当初の予定であるミトコンドリア機能についても評価する予定である。
現在は実際の低酸素、灌流状態を実現するのが困難であるため模擬的（化学的）虚血を用い静止モデルでの研究となっているが今後可能であれば当初の目標の実際の低酸素、灌流モデルを実現したいが費用、時間的には困難が予想される。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
低酸素モデルを作るのに様々な方法を試みているが十分な低酸素が実現できずにいる。このためまず模擬的な虚血状態（化学的なエネルギー枯渇状態）を作り上げることで細胞機能を測定することとなった。低酸素の実現するために時間を要したため本実験開始までがやや遅れてしまった。また、実験開始後に蛍光強度測定機器、ソフトの新しいバージョンへの交換があったため、実験結果が安定せず、原因を検索中である。これらから多数回の実験が必要であり、時間を要している。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在は実際の低酸素、灌流状態を実現するのが困難であるため模擬的（化学的）虚血を用い静止モデルでの研究となっている。今後可能であれば当初の目標の実際の低酸素、灌流モデルを実現したいが費用、時間的には困難が予想されるためまず現在の静止モデルでの細胞機能の変化を解明していきたい。
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| Causes of Carryover |
当初予定していた実験系の確立に時間を要しているため、未だ購入に至っていない実験器具、薬品等があることによる。また実験そのものが遅れていることも要因でとなっている。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
実験系の確立のための実験器具（ローラーポンプ、加温器等）と試薬、ガス、細胞培養用の器具などの消耗品に使用する予定である。
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