2014 Fiscal Year Research-status Report
口腔粘膜上皮におけるメカノセンサー Piezoの発現と機能調節
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25462861
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| Research Institution | Fukuoka Dental College |
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Principal Investigator |
畠山 純子 福岡歯科大学, 歯学部, 助教 (50374947)
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2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 口腔粘膜上皮 / 機械刺激センサー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
口腔は多様な刺激に晒されている。常に咀嚼、嚥下や会話等により物理的機械的な力がかかり、粘膜の構築はそれに対応して口腔内で頬、口蓋や舌などの部位による多様性を示していると考えられる。
本研究は、Piezo が口腔粘膜においても機械刺激のレセプターとして働くのではないか、また機械刺激を常に受ける口腔内において Piezo が口腔粘膜上皮の Anoikis に関わり、結果として皮膚に比べ数倍速い口腔粘膜上皮のターンオーバーがおこるのではないかと の仮説をたて、研究を行った。
研究は5週齢のC57/BL6Nマウスの皮膚と歯肉、頬粘膜および口蓋粘膜を対象に、発現の局在を免疫組織化学的検索により解析した。 また定量的PCRにより解析した。その結果、免疫組織化学的検索により、Piezo1が5週齢のマウス歯肉上皮および頬粘膜上皮の顆粒細胞 層、有棘細胞層に発現することが認められた。また定量的PCRにより、頬粘膜におけるPiezo1の発現は皮膚に比較して高い発現をして いることが明らかとなった。
これらの結果は、第56回 歯科基礎医学会学術大会・総会にて発表を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
機械刺激センサーとして知られるPiezo１の口腔粘膜上皮での発現は皆無である。申請者は口腔粘膜におけるPiezoの発現について免疫組織学的検討を行ってきたが、in Vivoでの染色を行った報告が少なく、どの抗体が染色に適しているか不明であった。そこでmRNAの発現の解析を行うべく、in situハイブリダイゼーションによる解析を開始したため、若干進行が遅延している。
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| Strategy for Future Research Activity |
1. Piezoの局在を明らかにする。
in situ ハイブリダイゼーションでPiezo1および2の局在を明らかにする。
2. 口腔組織におけるPiezoの発現量を明らかにする
5週齢のC57/BL6Nマウスの皮膚と歯肉、頬粘膜および口蓋粘膜にPiezo1の発現が認められることが確認された。さらにin situ ハイブリダイゼーションにより、口腔内の上皮にも発現量の違いが認められることから、レーザーマイクロダイセクションにて口腔粘膜上皮の部位による発現量の差異を明らかにする。
3. Piezoの機能解析を行う。
口腔粘膜上皮の初代培養を用いて、Whole cell patch clamp法にて機械的な刺激によるPiezoの膜電流変化を解析する。
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| Causes of Carryover |
申請者は口腔粘膜における免疫組織化学的検索により、Piezo1の発現を明らかにすべく研究を行っているが、これまで他の組織においてもin vivoでの染色を行った報告が少ないため、条件の検索が困難であった。そこで、in situハイブリダイゼーションによる検索を行うべく、現在条件を整えており、進行が遅延している。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
今後は、in situハイブリダイゼーションを用いて確認をする必要があると考えている。そこで、in situハイブリダイゼーションの薬品等を購入し染色を行う予定であり、次年度使用額が生じた。
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