2015 Fiscal Year Annual Research Report
歯周病細菌における病原性因子分泌調節メカニズムの解明
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25462925
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
雪竹 英治 長崎大学, 医歯薬学総合研究科 (歯学系), 技術職員 (30380984)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 歯周病細菌 / 分泌調節メカニズム / 9型分泌機構 / 二成分制御系 / ECFシグマ因子 / ゲルシフトアッセイ / 国際情報交換 / アリゾナ州 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
T9SSはP. gingivalisで発見された分泌機構であるが、Bacteroidetes門の細菌の多くが有する分泌機構であることがわかってきている。T9SSを構成するタンパク質の発現調節に関わるPorY, PorXおよびSigPタンパク質について遺伝生化学的解析を行った。
表面プラズモン共鳴法によりPorXとPorYとの結合の有無を調べた結果、乖離定数（KD）が1.409 X 10-6 Mの結合を示した。[ガンマ-32P]ATPを用いてPorYの自己リン酸化とPorXへのリン酸基転移がおこるかどうかを調べた。その結果、１分以内にPorYのリン酸化が生じること、さらにPorXの共存下では時間依存性にPorXへのリン酸基転移が生じることがわかった。
本菌のECFシグマ因子の１つであるSigPの欠損変異株はPorX変異株およびPorY変異株と同様にT9SSによるタンパク質分泌が低下していた。そこでマイクロアレイ解析でどのような遺伝子がSigPによって制御されているかを調べたところ、PorX制御下の遺伝子の多くがSigPによって制御されていること、さらにそのなかにPorTなどのT9SS構成遺伝子が多数含まれていることがわかった。さらにSigPはそれらのT9SS構成遺伝子のプロモータ領域に結合することがゲルシフトアッセイでわかった。
イムノブロット解析の結果、porX欠失変異株ではSigPタンパク質が完全に消失していることがわかった。
in vivoでの免疫沈降法およびin vitroでの表面プラズモン共鳴法を用いた解析からPorXはSigPと直接、結合することがわかった。
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