2016 Fiscal Year Annual Research Report
Long-term stability of bone regenerated by iPS cells in dental implant treatment
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25463064
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| Research Institution | Fukuoka Dental College |
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Principal Investigator |
城戸 寛史 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 教授 (90169897)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
茂野 啓示 京都大学, ウイルス・再生医科学研究所, 非常勤講師 (00162587)
寺岡 啓 国立研究開発法人産業技術総合研究所, その他部局等, 研究員 (00357542)
森永 健三 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 講師 (10509061)
山本 勝己 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 講師 (70425312) [Withdrawn]
園田 勉 国立研究開発法人産業技術総合研究所, その他部局等, 研究員 (80357334)
渡津 章 国立研究開発法人産業技術総合研究所, その他部局等, 研究員 (90358375)
加倉 加恵 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 講師 (90465740)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | iPS細胞 / 骨再生 / オートファジー / 骨分化誘導 / 再生療法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は犬の細胞からｉＰＳ細胞を確立し，骨再生に有効な骨系の細胞に分化させ，再生した骨の安定性を評価することを目的としたが，犬の細胞からの樹立したiPS様細胞は不安定で骨系の細胞への分化が困難であった．そこで，効率的なｉＰＳ細胞の骨分化誘導と再生療法への応用を目的に、3-Methyladenine（3MA）を用いてclassⅢ-Pl3K complexを阻害することにより、Autophagyの影響を検証した。3MA非添加（Control群）および添加群（3MA群）において、それぞれ、グループ①（通常培地）、グループ②（骨分化誘導培地（Ascorbic Acid,Hydrocortisone,β-Glycerophosphate）を作製し，Western blotting法（WB；Nanog,LC3）、細胞免疫染色（ICC；Nanog）、ALP染色、Real time RT-PCR（qRT-PCR；ALP,Runx2,Osterix），ICC（Osterix）にて評価を行った。
その結果，グループ①の通常培養では，ALP染色にて、Control群と比較して、3MA群の方がコロニー形態を保ち、ALP陽性細胞が多く見られる傾向にあり、WB法では、3MA群においてLC3-Ⅱの発現が減少したのに対し、Nanogの発現が増加した。グループ②の骨分化誘導では，qRT-PCRにて、Control群と比較して3MA群の方がRunx2、Osterixの増加を認めた。また、ICCにて3MA群の方が、Osterix陽性細胞が多く見られる傾向にあった。
AutophagyはiPS細胞の性状維持に関与することが示唆された。3MAを用いてAutophagyを抑制すると、通常培養下では、未分化を維持する傾向にあり、骨分化誘導下では、骨分化誘導を促進する傾向にあることが示唆された。
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