2013 Fiscal Year Research-status Report
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25463099
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
近藤 壽郎 日本大学, 歯学部, 教授 (70178416)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小倉 直美 日本大学, 歯学部, 講師 (10152448)
伊藤 耕 日本大学, 歯学部, 助教 (20419758)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 顎関節内障 / 顎関節滑膜細胞 / 炎症 / 非ステロイド系消炎鎮痛薬 / interleukin-1β / interleukin-6 / prostaglandin E2 |
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| Research Abstract |
今年度は，顎関節疾患の炎症病態における非ステロイド系消炎鎮痛薬 (NSAIDs)の効果を明らかにすることとした．Interleukin (IL)-1β刺激を加えた培養ヒト顎関節滑膜細胞（滑膜細胞）に，cyclooxygenase (COX) 非特異的阻害薬のインドメタシンまたはCOX-2特異的阻害薬のセレコキシブを作用させて，その効果を検討した．【方法】本学倫理委員会の指針に従い，顎関節内障患者の滑膜から out growth法で滑膜細胞を得た．IL-1β刺激滑膜細胞，IL-1β刺激滑膜細胞にインドメタシンまたはセレコキシブを作用させた．培養上清中の prostaglandin E2 (PGE2)および IL-6量は ELISA kitを用いて測定した．また，total RNAは RNeasy Mini kitを用いて抽出した．遺伝子発現量は， real time-PCR法で測定した．【結果および考察】滑膜細胞において，IL-1β刺激により上昇したPGE2産生はインドメタシンおよびセレコキシブ投与によって減少した．また，IL-1β刺激により上昇したCOX-2遺伝子発現，IL-6産生および遺伝子発現もインドメタシンおよびセレコキシブ投与によって減少した．インドメタシンおよびセレコキシブは COXの酵素活性阻害剤である．COX-2やIL-6の遺伝子発現の減少は，インドメタシンおよびセレコキシブによってPGE2産生が減少したことによるものと考えられた．そこで，滑膜細胞にPGE2を作用させたところ，IL-6産生の上昇が認められた．また，滑膜細胞はPGE2レセプターであるEP2, EP4の発現を確認した。以上の結果から，炎症状態下の滑膜細胞では，COX阻害薬投与によりPGE2産生だけではなく，PGE2によって産生上昇していた炎症性サイトカインの産生も減少することが示唆された．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
十数名の患者から顎関節滑膜組織を採取し,顎関節滑膜由来細胞（滑膜細胞）の分離・培養後しており,実験に使用可能な滑膜細胞の例数は増えている.
IL-1βまたはTNF-α刺激滑膜細胞のマイクロアレイを用いた網羅的遺伝子発現解析は順調に進んでいる.さらに, IL-1βまたはTNF-α刺激滑膜細胞にCOX阻害薬を投与した時の網羅的遺伝子発現解析も進めている.
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| Strategy for Future Research Activity |
インドメタシンやセレコキシブの消炎効果を分子生物学的に調べるため，IL-1βまたはTNF-α刺激滑膜細胞にインドメタシンやセレコキシブを投与してマイクロアレイ解析を行う．また，シグナリングパスウェイ解析を用いて，発現変動した遺伝子の分子間相互作用を調べる．
一方，滑膜細胞はPGE2刺激によってIL-6産生が上昇すること，滑膜細胞にはPGE2レセプターである EP2やEP4が発現していることを確認している．そこで，滑膜細胞にPGE2を作用させて炎症性因子の発現変動を調べるとともに，EP2, EP4を介したシグナル伝達経路を検討する．
さらに，IL-1βまたはTNF-α刺激滑膜細胞の網羅的遺伝子発現解析から，滑膜細胞が発現している炎症因子の分子間相互作用解析を進めるとともに，滑膜細胞にIL-1βまたはTNF-α以外の炎症刺激を行い，遺伝子発現解析を行なう．
以上の実験から，滑膜炎の分子プロセスを構築するとともに，病態関連因子を標的とした治療薬の検討を行う．
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