歯の萌出経路形成における歯槽骨骨吸収メカニズムの解明

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25463194
• Research Institution: Kyushu Dental College
• Principal Investigator: 森川 和政 九州歯科大学, 歯学部, 助教 (70514686)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 牧 憲司 九州歯科大学, 歯学部, 教授 (60209400)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 破骨細胞 / IP3R / ポドゾーム / インテグリン / 接着複合体 / ゼストスポンギンC / Adenophostin A

Research Abstract

今年度は破骨細胞におけるインテグリンの細胞内ドメインに形成される接着複合体を構成するSrcやCas、Pyk2とIP3R-III型との局在についてIP3RアンタゴニストであるゼストスポンギンCおよびアゴニストであるAdenophostin Aを用いて明らかにする予定であった。
〈実験１〉ラット破骨細胞様細胞の分離：７週齢ラット脛骨骨端部分からα-MEM溶液を注入して骨髄細胞を回収し、FBS、M-CSF、RANKL、活性型VD3を含むα-MEM溶液で一週間培養し、破骨細胞を形成を行った。
〈実験２〉IP3Rアンタゴニストを用いた実験（in vitro）：ラット骨髄細胞より破骨細胞を形成し免疫蛍光染色法を用いて、IP3RアンタゴニストであるゼストスポンギンCを作用させた破骨細胞におけるインテグリンの細胞内ドメインに形成される接着複合体を構成するSrcやCas、Pyk2とIP3R-III型との局在について共焦点レーザー顕微鏡にて観察を行った。ゼストスポンギンCの濃度量を設定・添加し、ゼストスポンギンCの存在下、非存在下における細胞接着部位であるポドゾームへの影響、変化についても共焦点レーザー顕微鏡にて観察を行った。
〈実験３〉IP3Rアゴニストを用いた実験（in vitro）：ラット骨髄細胞より破骨細胞を形成し免疫蛍光染色法を用いて、アゴニストであるAdenophostin A を作用させた破骨細胞におけるインテグリンの細胞内ドメインに形成される接着複合体を構成するSrcやCas、Pyk2とIP3R-III型との局在について共焦点レーザー顕微鏡にて観察を行った。Adenophostin Aの濃度量を設定・添加し、Adenophostin Aの存在下、非存在下における細胞接着部位であるポドゾームへの影響、変化についても共焦点レーザー顕微鏡にて観察を行った。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

本研究では、歯の萌出経路形成において重要な働きを持つ破骨細胞でのIP3Rの役割を免疫組織学、生化学的にさらに解明し、歯槽骨の骨吸収による歯の萌出に関わるメカニズムを明らかにすることを目的としているが、現在までのところ、〈実験２〉IP3Rアンタゴニストを用いた実験、および〈実験３〉IP3Rアゴニストを用いた実験において破骨細胞におけるインテグリンの細胞内ドメインに形成される接着複合体を構成するSrcやCas、Pyk2とIP3R-III型との局在に関する解析・解明が遅れているため。

Strategy for Future Research Activity

〈実験２〉IP3Rアンタゴニストを用いた実験、および〈実験３〉IP3Rアゴニストを用いた実験に関してラット骨髄細胞からの破骨細胞形成および免疫蛍光染色法において研究が進まない場合、ラットからマウス、ウサギへの動物種の変更などの対応が必要となる可能性がある。
また、26年度はIP3Rアンタゴニストを用いた実験、およびIP3Rアゴニストを用いた実験をin vitroだけでなくin vivoでも行う予定である。