The elucidation of the alveolar bone bone resorption mechanism in the eruption course formation of the tooth

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25463194
• Research Institution: Iwate Medical University
• Principal Investigator: 森川 和政 岩手医科大学, 歯学部, 教授 (70514686)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 牧 憲司 九州歯科大学, 歯学部, 教授 (60209400)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 破骨細胞 / IP３R / ポドゾーム / インテグリン / 接着複合体 / ゼストスポンギンC / Adenophostin A

Outline of Annual Research Achievements

本研究計画は、歯の萌出経路形成に関わる破骨細胞でのIP3R-Ⅲ型の役割の解明およびIP3R-Ⅲ型の細胞接着との関わりを解明するために、以前より行っているIP3Rアンタゴニストおよびアゴニストを破骨細胞に作用させる実験をさらにすすめ、IP3RアンタゴニストであるゼストスポンギンCおよびアゴニストであるAdenophostin A を作用させた破骨細胞におけるインテグリンの細胞内ドメインに形成される接着複合体を構成するSrcやCas、Pyk2とIP3R-Ⅲ型との局在について in vitroおよび in vivoで明らかにする予定である。さらにIP3R-Ⅲ型が破骨細胞の形質膜に発現することをタンパク、遺伝子レベルで解析し、細胞接着部位であるポドゾームとの関連を解明する予定である。
ラット破骨細胞を用いて、以前の研究でRT-PCR法による破骨細胞における遺伝子発現と免疫蛍光染色法による局在について研究を行なったが、今年度は昨年度に引き続き、破骨細胞全体における発現ではなく、破骨細胞の細胞接着部位であるポドゾームが局在する形質膜のみでのIP3R-Ⅲ型の発現を解明する予定であった。
〈実験１〉破骨細胞の細胞骨格画分による解析：ラット骨髄細胞から破骨細胞を形成した後、detergent-soluble fraction(細胞質)とdetergent-insoluble fraction(細胞骨格)に画分して、IP3R-Ⅲ型に特異的な抗体を用いて免疫沈降を行い、ウェスタンブロッティング法による解析を進めた。
また昨年度までは歯の萌出経路形成に関わる破骨細胞でのIP3R-Ⅲ型の発現と接着複合体を構成するSrcやCas、Pyk2とIP3R-Ⅲ型との局在についてIP3RアンタゴニストであるゼストスポンギンCおよびアゴニストであるAdenophostin Aを用いて解析を進めた。