2014 Fiscal Year Annual Research Report
１細胞広範シーケンス技術に基づく、放射線の突然変異誘発率の計測
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25550030
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
金井 昭教 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 助教 (60549567)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河合 秀彦 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 助教 (30379846)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 放射線 / 次世代シーケンサー / 1細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1細胞広範シーケンス技術に基づく放射線の突然変異誘発率の測定を試みるべく、ヒトHT1080細胞をFACSを用いて96穴プレートに1細胞ずつ分注し、細胞に0.4 Gyと2 Gyのγ線照射を行った。放射線照射後も培養を継続し、誘導された変異を確定させるため更なる細胞分裂を確認した後に照射・非照射細胞群からレーザーマイクロダイセクションを用いて1細胞ずつ単離した。単離した各1細胞からゲノムDNAを抽出し、MALBAC（Multiple Annealing and Looping Based Amplification Cycles）法を用いてDNAの増幅を行った。このようにして増幅したDNAをSure Select human all exonプローブでエクソン領域を濃縮した。得られたライブラリはillumina GAIIxにてシーケンシングを行った。
0.4 Gy、2 Gy照射の各2細胞ずつを用いて解析を行ったところ、2 Gy照射では7.5 Mbpに20個の変異と3個の挿入欠失を0.4 Gy照射では14 Mbpに27個の変異を検出した。
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