2014 Fiscal Year Annual Research Report
DNA損傷による遠隔作用変異：新規な遺伝子変異誘発機構の解明
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25550032
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
紙谷 浩之 広島大学, 医歯薬保健学研究院(薬), 教授 (10204629)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | DNA損傷 / 8-oxoG / 遠隔作用変異 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
(1) WRNノックダウンの8-oxoG:A対誘発変異への影響：8-oxoGの変異誘発経路には、ヌクレオチドプール中のdGTPが酸化されて生じる8-oxo-dGTPが鋳型DNA中のアデニン塩基に対して取り込まれる経路がある。そこで、この経路に対するWRNノックダウンの効果を調べた。変異経路の中間体である8-oxoG:A対を有するプラスミドを調製してWRNノックダウン細胞に導入したところ、変異頻度が有意に低下した。従って、WRN が、8-oxo-dGTPが誘発する変異に対しては促進的に作用することを明らかとした。
(2) DNA pol λノックダウンの8-oxoG:A対誘発変異への影響：上記の実験と同様に、DNA pol λをノックダウンした細胞に対して、8-oxoG:A対を有するプラスミドを導入したところ、変異頻度が有意に低下した。従って、DNA pol λも8-oxo-dGTP が誘発する変異に対しては促進的に作用することを明らかとした。
(3) WRNとDNA pol λのダブルノックダウン：WRNとDNA pol λのシングルノックダウン及びダブルノックダウンを行い、8-oxoG:C 対を有するプラスミドを導入した。その結果、いずれの場合も対照細胞に比較して、変異誘発能の上昇が観察された。変異体率はダブルノックダウン細胞>WRNノックダウン細胞>DNA pol λノックダウン細胞>対照細胞の序列であった。また、遠隔作用変異に関しては、ダブルノックダウン細胞とWRNノックダウン細胞が同程度であったことから、WRNとDNA pol λが遠隔作用変異を抑制する同一経路上にある可能性が示唆された。一方、8-oxoG→T変異に関してはダブルノックダウンにより相加的な変異率上昇が観察されたことから、この変異に関しては両者は別経路で抑制している可能性が示唆された。
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