2014 Fiscal Year Annual Research Report
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25560425
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| Research Institution | University of Fukui |
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Principal Investigator |
深澤 有吾 福井大学, 医学部, 教授 (60343745)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 凍結割断レプリカ標識法 / 分子形態 / 絶対量 / 超微構造 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
生命活動は細胞が発現する機能分子の相互作用により支えられている。従って、個々の現象に関わる分子の種類とその存在量（濃度）を生体が持つナノスケールの機能ドメイン単位で把握し、それらの相互作用と機能発現との相関や因果関係を知ることが、生命現象を深く理解することに繋がり、次世代の生物学へ向けたブレークスルーが生まれることが期待できる。本研究では、申請者がこれまで神経科学研究への応用に携わって来たSDS-digested Freeze-Fracture Replica分子標識法を膜分子の絶対量測定が可能な方法に発展させ、各機能分子の絶対量に基づいた生命現象の理解を可能にすることを目的として研究を行ってきた。
この目的の為、１）抗体標識法の改善、２）レプリカ上分子の形態観察による分子同定技術の確立、３）代謝標識法の応用を順次行うことを予定した。平成25年度は特に項目１に焦点を当て検討を行った。その結果、プローブ濃度と反応温度の最適化により標識強度が２倍以上になる条件を見出し、その後の標識実験に役立てている。また、前処理に関しては、レプリカのSDS化処理の温度、時間を検討したり、アルカリ処理による高原賦活化の標識への効果を検討したが、非特異的標識が増加するのみで、特異的な標識の増加には至らなかった。項目２）に関しては、自然科学研究機構・分子科学研究所の装置開発の原子間力顕微鏡を利用して、レプリカ標本の観察を試み、観察のためのノウハウの構築を行った。平成26年度は、申請者自身の福井大学への異動により、実験設備の移設と再立ち上げなど、実験基盤の再構築と研究環境の整備を行うことが主な活動内容となったが、高圧凍結装置や凍結割断レプリカ作製装置の両方を福井大学に導入し、共同研究者を受け入れて実験を行うなどして、実験が滞りなく行えるように整備した。また、これら実験で得られたデータを元に原著論文を発表した。
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[Journal Article] Coassembly and Coupling of SK2 Channels and mGlu5 Receptors2014
Author(s)
Garcia-Negredo G, Soto D, Llorente J, Morato X, Galenkamp KMO, Gomez-Soler M, Fernandez-Dunas V, Watanabe M, Adelman JP, Shigemoto R, Fukazawa Y, Lujan R, Ciruela F
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Journal Title
J Neurosci
Volume: 33
Pages: 14793-14802
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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