2014 Fiscal Year Annual Research Report
水溶液中における単一DNA分子のキラリティ変化の超高感度リアルタイム測定法の開発
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25620113
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
塚原 聡 大阪大学, 理学(系)研究科(研究院), 教授 (50207338)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | キラリティ / 蛍光検出円二色性 / タンパク質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成26年度は，平成25年度に引き続き，市販の円二色性(CD)の測定装置を用いて蛍光を検出する蛍光検出円二色性測定（Fluorescence Detected Circular Dichroism; FDCD）の基礎検討を続けた。この装置は，通常の光吸収の円二色性（吸収CD）のスペクトルを測定するものであるが，検出方法を変えることで，励起波長を変えながら，蛍光強度を検出することができる。
平成25年度に，タンパク質のFDCD検出では，偽シグナルが現れることがわかったので，平成26年度はその原因と解決法についてより詳しく検討した。そのために，蛍光物質であり互いにキラルなキニーネとキニジンをまず用いた。その結果，偽シグナルが現れる最大の原因は，分子回転が遅いことによる蛍光異方性であることがわかった。さらに，偽シグナルの強度は，検出器の設置場所にも依存することがわかった。
上記の結果に基づき，偽シグナルの出にくい検出器の設置場所を選び，蛍光ラベル化したアミノ酸およびタンパク質のFDCD測定を行った。その結果，蛍光ラベル化したアミノ酸では，LとDのアミノ酸で互いに正負が胸像関係のFDCDシグナルが測定され，測定方法の正当性が確認できた。さらに，蛍光ラベル化したタンパク質でも本来のFDCDシグナルを測定することが可能であった。
このように，平成26年度は，FDCD測定における偽シグナルの原因と解決法を明らかにした。この成果を基に，今後より高い感度でCD測定を行うことが可能になる。
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