2014 Fiscal Year Annual Research Report
RNAならびにRNA-タンパク質複合体を対象とするRNA診断法の開発
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25620132
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| Research Institution | Kyoto Institute of Technology |
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Principal Investigator |
村上 章 京都工芸繊維大学, 工芸科学研究科, 教授 (60210001)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | RNA診断 / 非コードRNA / miRNA / RISC / ピレンプローブ / 均一溶液系蛍光検出 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒトゲノムプロジェクトの成果は、従来意味が無いと考えられてきたDNAの殆どの領域が、「RNA」を介在分子として生命現象の極めて重要な働きを担っていることを明らかにした。とりわけ、タンパク質の情報を持たない非コードRNA（n-RNA）と称されるRNA群は生命機能発現の根幹をなすことが報告された。この事実はn-RNAが種々の疾患の発症にも大きく関わっていることを示唆している。
本研究はこうした背景から、n-RNAの検出、n-RNAの細胞内局在、機能発現時に形成されるRISC（RNA-induced Silencing Complex)の検出は疾患の診断に繋がる（RNA診断）ものと考え研究を遂行した。RNA選択的に蛍光検出可能なピレンRNAプローブを用い、以下に示す成果を得た。(1)特定の配列を有するRNAを無細胞系、生細胞系両系で高感度に検出する手法を確立した。この手法はHeLa細胞や血球細胞でも機能することを確認した。また、筋ジストロフィの発症に関わるスプライシング異常による関連RNAを高精度で検出できることを実証した。現在、臨床展開を視野に実証研究を遂行している。(2) n-RNAの機能はRNA-タンパク質複合体形成が不可欠であり（テロメラーセ、RISC等）、その蛍光検出を試みた結果、特定のRISCをピレンRNAプローブにより蛍光検出できることを確認した。同様の配列を持つアンチセンス核酸を用いることでRISCの機能制御を行うことにも成功した。この2種類の蛍光検出の機構の解明に金コロイド修飾RNAプローブを用いたが、形態学的な確認には至らなかった。本研究の初年度までの成果に基づいて申請した、体液中のmiRNAと癌との因果関係を明らかにするNEDOプロジェクトに採択され、本研究は2018年度まで継続されることとなり、医工連携研究へ展開したことも重要な実績であると考える。
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