レビー小体型認知症におけるシード依存的病原タンパク凝集反応の解明とその臨床応用

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25640029
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 新 竜一郎 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (90452846)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: レビー小体型認知症 / 神経変性疾患 / alpha-synuclein

Research Abstract

研究計画（１）について、まず6Xヒスチジンタグと融合させたalpha-synucleinの大腸菌発現用ベクターを作製した後、大腸菌に遺伝子導入し、発現を誘導した後、6Xヒスチジンタグに結合するカラムを用いて、Fast Protein Liquid Chromatography（FPLC）により、目的のalpha-synucleinタンパク質を精製した。その後タグの与える影響を測定するため、タグを除去した。精製したalpha-synucleinリコンビナントタンパクの２次構造解析をCD (circular dichroism：円二色性スペクトル)を用いて行い、alpha-synucleinリコンビナントタンパクがrandom coil様の構造をとっていることを確認した。研究計画（２）では（１）で精製したalpha-synucleinリコンビナントタンパクを用いてRT-QUIC法（シード依存的異常凝集タンパク高感度増幅法）の条件検討を行った。その結果、シードなしでは反応が起きないが、シードとしてレビー小体型認知症の脳組織のホモジネートとして加えたときのみ、反応が起きる条件を見出した。また電子顕微鏡を用いてRT-QUIC法において生成したフィブリルを観察した。さらにレビー小体型認知症の脳ホモジネート中のalpha-synuclein凝集体のシード活性をRT-QUIC法とEndo-point dilutionを組み合わせることにより半定量することにも成功した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

alpha-synucleinリコンビナントタンパクの精製、2次構造解析など現在のところ順調に遂行している。

Strategy for Future Research Activity

今後も研究計画にそって本研究を推進する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

次年度の研究計画遂行の上で必要性を認めたため。
次年度使用額は物品費として用いる予定である。