2013 Fiscal Year Research-status Report
レビー小体型認知症におけるシード依存的病原タンパク凝集反応の解明とその臨床応用
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25640029
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Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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Research Institution | Nagasaki University |
Principal Investigator |
新 竜一郎 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (90452846)
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Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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Keywords | レビー小体型認知症 / 神経変性疾患 / alpha-synuclein |
Research Abstract |
研究計画(1)について、まず6Xヒスチジンタグと融合させたalpha-synucleinの大腸菌発現用ベクターを作製した後、大腸菌に遺伝子導入し、発現を誘導した後、6Xヒスチジンタグに結合するカラムを用いて、Fast Protein Liquid Chromatography(FPLC)により、目的のalpha-synucleinタンパク質を精製した。その後タグの与える影響を測定するため、タグを除去した。精製したalpha-synucleinリコンビナントタンパクの2次構造解析をCD (circular dichroism:円二色性スペクトル)を用いて行い、alpha-synucleinリコンビナントタンパクがrandom coil様の構造をとっていることを確認した。研究計画(2)では(1)で精製したalpha-synucleinリコンビナントタンパクを用いてRT-QUIC法(シード依存的異常凝集タンパク高感度増幅法)の条件検討を行った。その結果、シードなしでは反応が起きないが、シードとしてレビー小体型認知症の脳組織のホモジネートとして加えたときのみ、反応が起きる条件を見出した。また電子顕微鏡を用いてRT-QUIC法において生成したフィブリルを観察した。さらにレビー小体型認知症の脳ホモジネート中のalpha-synuclein凝集体のシード活性をRT-QUIC法とEndo-point dilutionを組み合わせることにより半定量することにも成功した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
alpha-synucleinリコンビナントタンパクの精製、2次構造解析など現在のところ順調に遂行している。
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Strategy for Future Research Activity |
今後も研究計画にそって本研究を推進する。
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Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
次年度の研究計画遂行の上で必要性を認めたため。 次年度使用額は物品費として用いる予定である。
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