2014 Fiscal Year Research-status Report
ノンコーディングＲＮＡによるヒトES細胞の神経分化制御機構の解析
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25640038
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| Research Institution | Aichi Medical University |
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Principal Investigator |
岡田 洋平 愛知医科大学, 医学部, 准教授 (30383714)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ヒトES細胞 / ノンコーディングRNA / 神経分化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの研究で、ヒトES/iPS細胞の神経分化に伴って発現が上昇する、非翻訳領域にある転写産物の中で、特に発現量が高く、神経系特異的であると考えられる転写産物52個を同定し、さらに独自に開発した単層培養による迅速神経分化誘導法において、このうち40個の転写産物の発現上昇を確認した。そこでこの40個を初期の神経発生に重要なncRNAの候補として解析に用いることとした。
これまでのsiRNAを用いた実験では、ヒトES細胞を単一細胞まで解離した段階でリポフェクション法、あるいはエレクトロポレーション法によりこれら約40個の転写産物をターゲットとするsiRNAを導入し、迅速神経分化誘導を行い、定量的RT-PCRによりhSOX1の発現解析を行ってきたが、時に培養が不安定になることがあった。そこで、ヒトiPS細胞(201B7)を用いて、分化誘導に使用する低分子化合物（複数のシグナル阻害剤）を変更し、迅速神経分化誘導法の改良を行ったところ、安定した神経分化が可能になった。そこで、今後は、この培養法を用いて、スクリーニングを続行する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
迅速神経分化誘導法に改良を加え、安定した神経分化誘導が可能になった。
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| Strategy for Future Research Activity |
改良した迅速神経分化誘導法を用いて、絞り込んだ40個の転写産物に対するsiRNAを用いたスクリーニングを行う。また、スクリーニングで同定した転写産物については、shRNAベクターを用いたloss of functionの実験を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
効率的な物品調達が可能であったため、当初の予定に比べて、少ない物品費での研究の遂行が可能であった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度も、当初予定していたよりも多くの細胞培養等の実験を必要とすると考えられ、必要となる消耗品の購入に充てる予定である。
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[Journal Article] Utility of Scalp Hair Follicles as a Novel Source of Biomarker Genes for Psychiatric Illnesses2015
Author(s)
Maekawa M, PhD, Yamada K, Toyoshima M, Ohnishi T, Iwayama Y, Shimamoto C, Toyota T, Nozaki Y, Balan S, Matsuzaki H, Iwata Y, Suzuki K, Miyashita M, Kikuchi M, Kato M, Okada Y, Akamatsu W, Norio Mori N, Owada Y, Itokawa M, Okano H, Yoshikawa T
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Journal Title
Biological Psychiatry
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Long-term safety issues of iPSC-based cell therapy in a spinal cord injury model: oncogenic transformation with epithelial-mesenchymal transition.2015
Author(s)
Nori S, Okada Y, Nishimura S, Sasaki T, Itakura G, Kobayashi Y, Renault-Mihara F, Shimizu A, Koya I, Yoshida R, Kudo J, Koike M, Uchiyama Y, Ikeda E, Toyama Y, Nakamura M, Okano H.
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Journal Title
Stem Cell Reports
Volume: 4
Pages: 360-373
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Involvement of ER Stress in Dysmyelination of Pelizaeus-Merzbacher Disease with PLP1 Missense Mutations Shown by iPSC-Derived Oligodendrocytes2014
Author(s)
Numasawa-Kuroiwa Y, Okada Y, Shibata S, Kishi N, Akamatsu W, Shoji M, Nakanishi A, Oyama M, Osaka H, Inoue K, Takahashi K, Yamanaka S, Kosaki K, Takahashi T, Okano H
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Journal Title
Involvement of ER Stress in Dysmyelination of Pelizaeus-Merzbacher Disease with PLP1 Missense Mutations Shown by iPSC-Derived Oligodendrocytes
Volume: 2
Pages: 648-661
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Pathological roles of the VEGF/SphK pathway in Niemann-Pick Type C neurons2014
Author(s)
Lee H, Lee JK , Park. MH, Hong YR, Marti H , Kim H, Okada Y, Otsu M, Seo E, Park J, Bae JH, Okino N, He X, Schuchman E, Bae J, Jin HK
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Journal Title
Nat. Commun.
Volume: 5
Pages: 5514
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Dysmyelination and Enhanced ER Stress Response in Pelizaeus-Merzbacher Disease Patients iPSCs-Derived Oligodendrocytes with PLP1 Gene Missense Mutations.2014
Author(s)
Numasawa Y, Okada Y, Shibata S, Kawabata S, Nakamura M, Kishi N, Akamatsu W, Oyama M, Osaka H, Inoue K, Takahashi K, Yamanaka S, Kosaki K, Takahashi T, Okano H,
Organizer
Neuroscience 2014
Place of Presentation
浜松
Year and Date
2014-11-15 – 2014-11-19
Invited
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