2015 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
25650007
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
木村 博信 大阪大学, たんぱく質研究所, 助教 (60378891)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | DNAメチル化 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
次世代シーケンサーを用いたDNAメチル化状態の網羅的解析により、さまざまな細胞におけるメチル化模様が明らかになってきている。これまでDNAメチル化を触媒する酵素は同定されているものの、どのようにメチル化模様を形成するのかわかっていない。私は、メチル化模様形成機構を明らかにする目的で、de novo型DNAメチル化酵素Dnmt3aと結合するタンパク質の網羅的解析を行った。その結果、Dnmt3aと結合する候補タンパク質として転写伸長因子Rpb1を同定した。本研究計画は、Rpb1とDnmt3aの結合様式を明らかにすることを目的にしている。
これまでに、細胞内においてRpb1とDnmt3aが結合していることや転写が活性化されているAtp5b遺伝子上でDnmt3aが存在していることを明らかにした。最終年度は、Dnmt3a欠損ES細胞を用いて、Dnmt3aがAtp5b遺伝子内のメチル化模様形成に関与しているかについて調べた。その結果、Dnmt3a欠損ES細胞では、Atp5b遺伝子内のDNAメチル化レベルが約50%低下していることが明らかになった。また、Dnmt3a/Dnmt3b両欠損ES細胞では、Atp5b遺伝子内のDNAメチル化が消失していた。次に、Rpb1とDnmt3aの結合様式を調べる目的で、Rpb1遺伝子cDNAをサブクローニングして、発現ベクターに組み込み、293T細胞内でDnmt3aと結合するかを検討した。その結果、Rpb1とDnmt3と結合することを確認した。Rpb1とDnmt3aが直接結合するかを確認するために、リコンビナントRpb1の精製することを検討した。現在は、Rpb1 cDNAをバキュロウイルスに組み込み、昆虫細胞での発現を試みている。
|
-
[Journal Article] Dual functions of the RFTS domain of Dnmt1 in replication-coupled DNA methylation and in protection of the genome from aberrant methylation.2015
Author(s)
Garvilles, R., Hasegawa, T., Kimura, H., Sharif, J., Muto, M., Koseki, H., Takahashi, S, Suetake, I., Tajima, S.
-
Journal Title
PLoS ONE
Volume: 10
Pages: e0137509
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
