2015 Fiscal Year Annual Research Report
組織性カリクレインによる神経幹細胞の増殖促進機構の解析
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25650039
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| Research Institution | Tokyo University of Science, Yamaguchi |
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Principal Investigator |
岩館 寛大 山口東京理科大学, 工学部, 講師 (70279107)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 組織性カリクレイン / 神経幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの研究でカリクレインが神経幹細胞のNF-κB経路を抑制することが確認された。NF-κB経路の活性化は神経幹細胞の分化を促進する報告があることから，カリクレインは神経幹細胞の分化を抑え，その結果みかけの細胞増殖速度が増加していることが考えられた。そこで，NF-κB経路を活性化する経路を調べた結果，カリクレインは IL-1 type I 受容体を切断することが示され，このタンパク質がカリクレインの基質であることが明らかとなった。
そこで，本年度はIL-1シグナルの阻害が神経幹細胞に与える影響を解析した。はじめに，IL-1受容体アンタゴニスト (IL-1RA) が神経幹細胞に与える影響を調べた。IL-1RAによりNF-κB経路が抑制されるか免疫染色で調べた結果、IL-1RAにより、リン酸化RelA陽性細胞が減少していることが確認され，IL-1RAによりNF-κB経路が抑制されることが確認できた。そこで，IL-１RAをNSCの培養液に添加して細胞増殖を調べたところ，0~300 ng/mLの濃度では増殖抑制作用が認められず，IL-1RAでは神経幹細胞の増殖促進作用を示さないことが分かった。次に，カリクレインによるIL-1 typeI 受容体の加水分解と同様の現象を再現するために，siRNAによるIL-1 type1 受容体のノックダウンを試みた。”siDirect”を利用してIL-1 typeI 受容体に特異的なsiRNAな配列を検索し，3つのsiRNAの合成を行った。このsiRNAを用いた結果，3種類のsiRNAのうち，2種類について十分なIL-1 typeI受容体の発現量が抑制され，神経幹細胞のIL-1 typeI受容体をノックダウンするsiRNAを調製することができた。現在，これらのsiRNAを用いてIL-1 typeI 受容体のノックダウンが神経幹細胞の増殖に与える影響を解析している。
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