2014 Fiscal Year Annual Research Report
大きさと色素数を厳密制御した蛍光プローブによる細胞内Ca2+動態の高時空間分解
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25650055
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| Research Institution | Waseda University |
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Principal Investigator |
鈴木 団 早稲田大学, 重点領域研究機構, 准教授 (40350475)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
新井 敏 早稲田大学, 重点領域研究機構, 招聘研究員 (70454056)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 可視化 / 生物物理 / ナノ材料 / マイクロ・ナノデバイス / 細胞・組織 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
生命活動の基本的な情報伝達機構であるCa2+シグナルの、新しい測定技術の開発を目的とする。初年度に、本合成で最もステップ数の多いCa2+蛍光プローブの合成を終えた。これを用いてプロトタイプの蛍光プローブを合成し、既存の顕微鏡系を用いたプレ評価を行った。HeLa細胞をモデル細胞として、細胞内での評価も行った。蛍光強度、バックグラウンド、シグナル・ノイズ比、細胞毒性、細胞内での分散性、細胞内での局在能の付加、といった基本情報を元に、一つのプローブ設計指針に到達した。そこで、次のプローブ合成を行い、これについての評価を進めた。顕微鏡系はプローブに合わせ、最適となるよう変更した。生きたHeLa細胞内にプローブを導入し、まずプロトタイプと同様に、シグナル・ノイズ比、細胞毒性、細胞内での分散性、細胞内での局在能の付加といった基本性能を確認した。これらとあわせ、HeLa細胞を刺激した際に生じる細胞内Ca2+濃度変化がどのように計測されるかについて、顕微鏡下で評価した。しかしCa2+蛍光プローブの蛍光強度が低く、広くパラメータをふった条件検討を行うのにあわせ、顕微鏡系の再検討も行ったが、十分なシグナル・ノイズ比を得られないことが次年度の初期に明らかとなった。そこで別のパラメータを計測できるプローブを用いることにした。またこれと並行して、プローブを細胞内小器官へ選択的に集積させる仕組みを導入した。これらについては成功したことから、現在、論文発表の準備を進めている。
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