2013 Fiscal Year Research-status Report
| Project/Area Number |
25660010
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
|
| Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
|---|
Principal Investigator |
松尾 幸毅 独立行政法人産業技術総合研究所, 生物プロセス研究部門, 主任研究員 (10358012)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | 遺伝子組換え / プロテアーゼ / インヒビター / 組換えタンパク質 |
|---|
| Research Abstract |
2013年度は、まず、さまざまな生物種よりプロテアーゼインヒビター遺伝子の単離を実施した。各種生物に由来するcDNAライブラリーなどから、プロテアーゼインヒビター特異的なプライマーを用いたPCRにより遺伝子を増幅することで、当該遺伝子を単離した。単離したそれぞれの遺伝子を植物遺伝子組換え用バイナリ―ベクターへクローニングした。構築したバイナリ―ベクターを、植物遺伝子組換えのためのAgrobacterium tumefaciens（アグロバクテリウム）へ導入し、植物遺伝子組換えに用いるアグロバクテリウムを作成した。
プロテアーゼインヒビター遺伝子を導入したアグロバクテリウムを用いて、本研究でのモデル植物でありタバコの一種であるNicotiana benthamianaの遺伝子組換えを実施した。得られた再分化個体に対して、RT-PCRによるプロテアーゼインヒビター遺伝子の発現解析、ウエスタンブロットによるプロテアーゼインヒビター発現解析を行った。これらの解析で良好な結果を得られた再分化個体については、導入された遺伝子のコピー数についても検討を加え、シングルコピーの再分化個体の選抜を行った。4種類のプロテアーゼインヒビターについて、それぞれのプロテアーゼインヒビターを生産する遺伝子組換えNicotiana benthamianaを作出した結果、プロテアーゼインヒビターの生産が認められ、かつ、シングルコピーと推定される植物体が複数系統得られており、今後これらを用いて研究を進める予定である。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
プロテアーゼインヒビター生産遺伝子組換えNicotiana benthamianaの作出、一過性発現ともに計画通りに順調に進んでいる。
|
| Strategy for Future Research Activity |
これまでに獲得した遺伝子組換え体をもとに、ホモ個体の獲得を行う。また、遺伝子組換え植物体を用いて、モデルタンパク質の一過性発現を実施し、生産量について野生型との比較検討を行う。
|
| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
当初インキュベーターを購入予定であったが、設置場所等の問題により購入を次年度に先送りした。今年度あらためて購入を予定している。
インキュベーターの購入に50万円程度、また、国内旅費として10万円程度を見込んでおり、残額で消耗品の購入を予定している。
|
