2014 Fiscal Year Annual Research Report
血栓形成と止血剤の研究を支援する血液凝固酵素の高反応性基質ペプチド
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25660078
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
人見 清隆 名古屋大学, 創薬科学研究科, 教授 (00202276)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 血液凝固 / 酵素 / カルシウム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
血液凝固は多段階の化学反応を経て、最終的にフィブリンが血液凝固第13因子（Factor XIII；以下FXIII）によって、共有結合レベルで架橋重合を受けて不溶化し、「かさぶた」として凝固が完了する。このFXIIIはトランスグルタミナーゼと呼ばれる酵素であるが、これまで本酵素に対する高反応性のペプチド配列（F11）をペプチドライブラリより取得しており、その活用法として、血液凝固を調節する因子として活用、また血液凝固疾患において貢献できる素材の作製などを目的に本課題に取り組んできた。まず、FXIIIの体内分布を調べ、血栓形成の起こりやすい場所を特定することを考えた。我々は、これまでマウス全切片を効率よく解析できる技術を確立しており、これらのマウス切片でペプチド配列を用いた活性の可視化、またRNA発現パターンと抗体による蛋白質としての発現パターンを明らかにすることを試みた。RNA発現による発現パターン解析を完了したが特定の臓器への強い発現はなかった。（２）ペプチド配列F11の活用については、フィブリンの架橋阻害についての試みは競合阻害することは困難であったが、このペプチド取り込んだフィブリンは、正常なフィブリンとは異なる架橋様式をとった。そのため、F11を固相化さえすれば、フィブリン架橋をペプチドに親和性のある固相で行えることも可能であるとわかった。（３）血液凝固の疾患モデル生物の確立をめざして、FXIIIの変異個体を得ることを試みた。マウスでは異常な活性（欠失）は流産を引き起こしたり寿命が短くなったり等、取扱いが困難である。そこで近年、創薬研究（初期スクリーニングや安全性評価）に用いられることの多い、メダカを用いた。メダカにはFXIIIの相当する遺伝子が存在したので、組換え蛋白質作製による生化学的解析、抗体による発現分布解析、変異個体の作製に挑み、いずれも順調に進行した。
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| Remarks |
血液凝固ならびに関連するアイソザイムのマウス全切片での発現パターンを解析した
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