2014 Fiscal Year Annual Research Report
フグ毒結合タンパク質遺伝子ノックアウトによるトラフグ毒化機構の証明
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25660169
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
大嶋 雄治 九州大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (70176874)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
島崎 洋平 九州大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (40363329)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | フグ毒 / 遺伝子編集 / 毒化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
トラフグ(Takifugu rubripes)毒化における、フグ毒結合タンパク質の関与を証明するため、トラフグのフグ毒結合タンパク質遺伝子(Pufferfish Saxitoxin and Tetrodoxin binding protein 2, TrubPSTBP2)に対するノックアウト系の構築を試みた。当初Transcription Activator-like Effector Nucleases (TrubPSTBP3-TALEN)を用いたノックアウト系の構築を試みた。 しかしターゲット遺伝子が複雑なため、CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat)//CRISPR associated proteins(Cas9)システムを用いてノックアウト系構築に変更した。CRISPER/Cas9システムを用いて試行を行い、 メダカにおいてPSTBP2のホモログであるTBT-bp1およびTBT-bp2の遺伝子破壊に成功した。この系のPSTBP2遺伝子破壊の動作を調べるために必要な、ヒートショック誘導TrubPSTBP2発現型トランスジェニックメダカのホモ接合型(TrubPSTBP2発現メダカ)系統の作成を行ったが、本トランスジーンの熱に対する発現のレスポンスが悪く、発現が不完全で、へい死も出たためホモ化ができなかった。よって、一気にトラフグ授精胚を用いてPSTBP2-CRISPER/Cas9 を用いて、PSTBP2遺伝子の破壊を試みた。処理したトラフグ胚（3日目）を用いて、HMA (Heteroduplex Mobility Assay)を行い、変異導入を確認した。その結果、24検体中20個体の胚で、変異が確認出来た。よってPSTBP2-CRISPER/Cas9の遺伝子破壊ができた。現在、クローニングを行い確認を行っている。本研究により、フグ毒結合タンパク質KO遺伝子破壊系統作出の準備ができた。
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