2013 Fiscal Year Research-status Report
核局在性非コードRNAの高効率ノックダウンに向けたAgo2の核移行メカニズム解明
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25670013
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
櫻井 文教 大阪大学, 薬学研究科(研究院), 准教授 (70370939)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | argonaute 2 / 核移行 / 細胞内動態 / RNA干渉 |
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| Research Abstract |
近年、核内にタンパク質をコードしない多くの長鎖非コードRNAが存在し、クロマチン修飾因子などと複合体を形成して遺伝子発現を制御するとともに、その発現が疾患とも大きく関連することが明らかとなってきた。従って核局在性の長鎖非コードRNAも重要な創薬ターゲットであり、その制御には標的RNAを分解するsiRNAが有用と期待される。しかし、核局在性RNAをsiRNAで分解するには、siRNAとともに標的RNAを切断するArgonaute 2 (Ago2)が核に局在する必要がある。申請者は既にAgo2の一部が核に局在することを見出しているが、Ago2は分子量約100kDaであることから能動輸送により核移行していると予想される。しかしAgo2には既知の核移行シグナルが無く、その核移行メカニズムは不明である。そこで本研究では、核局在性RNAの高効率ノックダウンやAgo2の核での機能解明に向けて、Ago2の核移行メカニズムを明らかにすることを試みた。まず、Ago2の各機能ドメイン（RNA結合ドメインやRNA切断活性ドメイン）に変異を加えた変異型Ago発現プラスミドを作成した。それらのプラスミドをHeLa細胞にTransfectionしたのち、核及び細胞質画分に分離したところ、TNRCファミリー蛋白質とのに変異を加えたAgo2では、核への局在が大きく抑制されていた。そこで、TNRC6AおよびTNRC6Bをノックダウンしたところ、TNRC6Aをノックダウンした場合に、Ago2の核移行が大きく阻害された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
既にAgo2の核移行に重要なドメインを同定することに成功するとともに、Ago2の核移行に重要となるタンパク質の同定にも成功している。本成果は4回の学会（うち1回は国際学会）で発表した。
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| Strategy for Future Research Activity |
Ago2の核移行に関与するImportinファミリーの同定を試みるとともに、Ago2の核移行を阻害した場合に、核局在性の非コードRNAのノックダウンが阻害されるか検討する。またAgo1の核移行メカニズムについても、Ago2と同様の機構により核移行しているのか検討する。
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