2013 Fiscal Year Annual Research Report
器官サイズ制御因子ＹＡＰ標的転写産物の網羅的発現解析
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25670021
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
仁科 博史 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (60212122)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | YAP / 肝臓 / 肝がん / cDNAマイクロアレイ / HTVi法 / microRNA / Hippo系 / 発生・分化 |
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| Research Abstract |
Hippoシグナル伝達系は、近年、発生・分化・器官サイズ・癌の発症進展を制御することが明らかにされ、国内外から急速に注目され ている。本研究では、hydrodynamic tail vein injection (HTVi)法という簡便に肝臓特異的に遺伝子を導入する方法を用いて、Hippo 系主要標的転写共役因子YAPの活性のgain of functionによる肝癌誘発状態を作り出し、マイクロアレイやChip-seq解析によって、マ ウス肝臓での転写情報(特にマイクロ(micro)RNAの発現)を解析することを目的とする。得られた転写情報を、正常増殖から腫瘍性増 殖、腫瘍形成、転移に至る幅広いスペクトラムの表現型と比較対応し、癌を成立させるmRNAやマイクロRNAを効率よく抽出するととも に、“細胞競合(cell competition)説”の観点から検証する。本研究では、肝臓での安定な発現を期待して、アルブミンプロモーター の下流に、メダカと保存性の高いヒトの野生型および5SA変異YAPをコードするcDNAを挿入したベクターを利用した。HTVi法によって、 4~8週令のマウスに、上記発現ベクターを導入し、8週間以降に5SA特異的な肝癌が誘導されていたので、1, 4, 8週間後にマウ スを解剖し、肝臓を取り出した。肝癌が形成されている場合は、癌部と非癌部を分け、タンパク質解析用、microRNAマイクロアレイ用 、cDNAマイクロアレイ用、組織染色用に肝臓を分けて処理した。その結果、YAPの直接標的転写産物候補を複数同定することに成功した。
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[Journal Article] Control of the Hippo pathway by Set7-dependent methylation of Yap.2013
Author(s)
Oudhoff MJ. Freeman SA, Couzens AL, Antignano F, Kuznetsova E, Min PH, Northrop JP, Lehnertz B, Barsyte-Lovejoy D, Vedadi M, Arrowsmith CH, Nishina H et al.
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Journal Title
Dev. Cell
Volume: 26
Pages: 188-194
DOI
Peer Reviewed
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