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2013 Fiscal Year Research-status Report

肺がん転移に関与するシアリルルイス抗原キャリアータンパク質の同定と診断法の開発

Research Project

Project/Area Number 25670166
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research

Research InstitutionKochi University

Principal Investigator

本家 孝一  高知大学, 教育研究部医療学系, 教授 (80190263)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 姜 松林  高知大学, 学内共同利用施設等, 助教 (80598540)
Project Period (FY) 2013-04-01 – 2015-03-31
Keywords糖鎖 / シアリルルイスX / スルホルイスX / 肺腺がん / 血行性転移
Research Abstract

大量培養したヒト肺腺がん細胞ABC-1から膜タンパク質を可溶化し、WGAレクチンアフィニティークロマトグラフィー、シアリルルイス抗原に対する抗体を固相化したイムノアフィニティークロマトグラフィー、MonoQイオン交換クロマトグラフィーに順次かけてシシアリルルイスX抗原キャリアータンパク質を精製した。精製タンパク質をSDS-PAGEにかけ、分子量190 kDaの部位のゲルを切り出し、トリプシンでゲル内消化を行った後、抽出したペプチド断片をnanoLC-MALDI-TOF/TOF質量分析装置にかけ、タンパク質を同定した。
Gal3ST-2導入細胞の膜タンパク質抽出液を、同定したタンパク質に対する抗体を用いて吸収実験を行い、分子量170 kDaのスルホルイスX抗原キャリアータンパク質が親細胞ABC-1のシアリルルイスX抗原キャリアータンパク質と同じタンパク質であることを確認した。
siRNAテクノロジーを用いてABC-1細胞における190 kDaタンパク質の発現をノックダウンして、細胞表面におけるシアリルルイスX抗原の発現変化をフローサイトメトリーで調べたが変化がみられなかった。このことから細胞表面のシアリルルイスX抗原キャリアータンパク質は別のタンパク質であることが示された。このため、抗シアリルルイスX抗体で認識される分子量250 kDa以上の高分子量タンパク質が目的のタンパク質である可能性が考えられたので、これを精製して質量分析装置で同定した。
この高分子量タンパク質のペプチド部分に対する抗体は、抗シアリルルイスX抗体と同様に細胞表面を染色するので、このタンパク質が目的タンパク質である可能性が高い。いろいろと試みたが、これまでのところsiRNAテクノロジーでこのタンパク質をノックダウンすることに成功していない。現在CRISPRテクノロジーによるノックアウトを同時進行で試みている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

平成25年度計画の目標であったシアリルルイスX抗原キャリアータンパク質の同定が完了したので。

Strategy for Future Research Activity

計画どおり、シアリルルイスX抗原キャリアータンパク質の血行性転移への関与を明らかにするとともに、シアリルルイスX抗原とキャリアータンパク質を同時検出するサンドイッチELISA法を開発する。

  • Research Products

    (7 results)

All 2014 2013

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results) Presentation (1 results) (of which Invited: 1 results) Book (2 results)

  • [Journal Article] Efficient siRNA delivery and tumor accumulation mediated by ionically cross-linked folic acid-poly(ethylene glycol)-chitosan oligosaccharide lactate nanoparticles: For the potential targeted ovarian cancer gene therapy.2014

    • Author(s)
      Li TSC, Yawata T, Honke K
    • Journal Title

      Eur. J. Pharm. Sci.

      Volume: 52 Pages: 48-61

    • DOI

      10.1016/j.ejps.2013.10.011.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Expressed glycosylphosphatidylinositol-anchored horseradish peroxidase identifies co-clustering molecules in individual lipid raft domains.2014

    • Author(s)
      Miyagawa-Yamaguchi A, Kotani N, *Honke K
    • Journal Title

      PLoS ONE

      Volume: 9 Pages: e93054

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0093054. eCollection 2014.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Loss of branched O-mannosyl glycans in astrocytes accelerates remyelination.2013

    • Author(s)
      Kanekiyo K, Inamori K, Kitazume S, Sato K, Maeda J, Higuchi M, Kizuka Y, Korekane H, Matsuo I, Honke K, Taniguchi N
    • Journal Title

      J. Neurosci.

      Volume: 33 Pages: 10037-10047

    • DOI

      10.1523/JNEUROSCI.3137-12.2013.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Biosynthesis and biological function of sulfoglycolipids.2013

    • Author(s)
      Honke K
    • Journal Title

      Proc. Jpn. Acad. Ser. B Phys. Biol. Sci.

      Volume: 89 Pages: 129-138

    • DOI

      10.2183/pjab.89.129

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] GPI-アンカー型HRP融合タンパク質がつくる脂質ラフトドメイン2013

    • Author(s)
      本家孝一、山口亜利沙、小谷典弘
    • Organizer
      第86回日本生化学会大会、シンポジウム
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      20130912-20130912
    • Invited
  • [Book] Handbook of Glycosyltransferases and Related Genes 2nd Ed2014

    • Author(s)
      Honke K.
    • Total Pages
      36
    • Publisher
      Springer
  • [Book] Medical Biochemistry 4th Ed2014

    • Author(s)
      Elbein AD, Honke K
    • Total Pages
      27
    • Publisher
      Saunders Elsevier

URL: 

Published: 2015-05-28  

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