2013 Fiscal Year Research-status Report
Smad依存的スプライソソーム複合体形成と選択的スプライシンング
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25670168
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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| Research Institution | Showa Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
坂田 宣夫 昭和薬科大学, 薬学部, 講師 (00170598)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊東 進 昭和薬科大学, 薬学部, 教授 (70223154)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | シグナル伝達研究の新展開 |
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| Research Abstract |
Smad 分子はTGF-βシグナル伝達で細胞内シグナル伝達分子として働くが、本研究では新たな役割としてスプライシング制御に関わる可能性を検討している。網羅的解析で同定されたSmad結合タンパク質のうち、スプライソソーム複合体構成分子のLUC7L3とSmad類の結合をCOS7細胞での大量発現系を用いる免疫共沈降法（Co-IP）で分析した。１）V5-Smad2、V5-Smad3、V5-Smad4とFlag-LUC7L3を用いたCo-IPで、LUC7L3とSmad2、LUC7L3と Smad3、LUC7L3とSmad4との結合は確認できなかった（V5でIP）。２）V5-Smad2、V5-Smad3とFlag-LUC7L3を用いたCo-IPで、LUC7L3とSmad2、LUC7L3と Smad3との結合は確認できなかった（FlagでIP）。３）V5-Smad2、V5-Smad3、V5-Smad4とFlag-LUC7L3を用いたCo-IPで、LUC7L3とSmad2、LUC7L3とSmad3との結合をTGF-βI型受容体構成的活性化体（ALK5ca）存在下、LUC7L3とSmad4との結合をALK5ca存在下、及び、BMPI型受容体構成的活性化体（ALK6ca）存在下検討したが結合を確認できなかった。４）V5-Smad1、V5-Smad5、V5-Smad8とFlag-LUC7L3を用いたCo-IPで、LUC7L3とSmad1、LUC7L3とSmad5、LUC7L3とSmad8との結合をALK6ca存在下検討したが結合を確認できなかった。５）V5-Smad6、V5-Smad7とFlag-LUC7L3を用いたCo-IPで、LUC7L3とSmad6、LUC7L3とSmad7との結合を確認できなかった。６）前記の5）と同様なCo-IPで、LUC7L3とSmad6、LUC7L3とSmad7との結合をALK5ca存在下、及び、ALK6ca存在下検討したが結合は確認できなかった。以上のように本研究では、現在までスプライソソーム複合体構成分子とSmad類の物理的会合を確認するに至っていない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
実験計画の最初のステップであるスプライソソーム複合体構成分子LUC7L3とSmad類の物理的会合を確認出来ていない。その理由として次の事が考えられる。１）LUC7L3とSmadとの結合を他のスプライソソーム構成分子が干渉している。２）LUC7L3はSmadとは結合せず、他のTGF-βシグナル伝達分子と結合し、スプライシング機構に影響を与えている。３）LUC7L3のFlag tagがSmadとの結合を妨げている。
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| Strategy for Future Research Activity |
他の因子等も含めたLUC7L3とSmadとの結合の検討、TGF-βシグナル伝達における他の分子との結合についても検討する必要がある。今後先ずはHepG2細胞を用いたルシフェラーゼアッセイ法によりTGF-βシグナル伝達におよぼすLUC7L3の影響を検討する作業を進め、結合の確認に繋げていきたい。
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Research Products
(5 results)
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[Journal Article] ZFHX4 Interacts with the NuRD Core Member CHD4 and Regulates the Glioblastoma Tumor-Initiating Cell State.2014
Author(s)
Yakov Chudnovsky, Riko Nishimura, Nobuo Sakata, Howard A. Fine, Anne E. Carpenter, Serena J. Silver, Roel G.W. Verhaak, Andrea Califano, Richard A. Young, Keith L. Ligon, Ingo K. Mellinghoff, David E. Root, David M. Sabatini, William C. Hahn, Milan G. Chheda, et al.
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Journal Title
Cell reports
Volume: 6
Pages: 313-324
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] C18 ORF1: A Novel Negative Regulator of TGF-β Signaling2014
Author(s)
Naoko Nakano, Kota Maeyama, Nobuo Sakata, Fumiko Itoh, Ryosuke Akatsu, Miki Nakata, Yuki Katsu, Souichi Ikeno, Yoko Togawa, Thao Thanh Vo Nguyen, Yukihide Watanabe, Mitsuyasu Kato, Susumu Itoh
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Journal Title
J. Biol. Chem.
Volume: 289
Pages: 12680-12692
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] 2.TGF-β signaling cooperate with ATBF1 in AFP transcription
Author(s)
Nobuo Sakata, Satoshi Kaneko, Souichi Ikeno, Yutaka Miura, Hidekazu Nakabayashi, Xue-Yuan Dong, Jin-Tang Dong, Taiki Tamaki, Naoko Nakano, Susumu Itoh
Organizer
The 3rd International Symposium by JSPS Core-to-Core Program “Cooperative International Framework in TGF-β Family Signaling”
Place of Presentation
大和屋本店（松山市）
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