新規高感度迅速起因菌同定法とNF-κB病態解析法を統合した敗血症検査システム構築

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25670268
• Research Institution: University of Toyama
• Principal Investigator: 北島 勲 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 教授 (50214797)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 仁井見 英樹 富山大学, 大学病院, 助教 (50401865)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: 感染症 / 微生物 / 一分子計測 / 敗血症 / 転写因子

Outline of Annual Research Achievements

高感度かつ迅速に敗血症等の起因菌を同定するシステム開発を引き続き行った、１）16S ribosomal nested PCRを施行し、PCR産物のTm値より起因菌を同定するTmマッピング法の検出精度を向上させ、臨床検体からの評価を実施した。敗血症が疑われた患者全血液200検体を検討し、85.5％(171/200)検体がPCRによるTmマッピング解析と通常の血液培養結果（陽性と陰性両者）と一致した。130検体がTmマッピング法で陰性であり、そのうち128検体（128/130、98.5％）が培養法でも陰性であった。70検体がTmマッピング法で陽性であり、そのうち59検体が起炎菌を同定し、シーケンサーによる遺伝子配列解析と100％マッチしていた。以上より、本Tmマッピング法の検出精度の高さが確認できた。３）子宮内感染症において、羊水中の細菌、真菌、マイコプラズマ、ウレアプラズマに対して、本eukaryote made Taq plolymeraseを用いたリアルタイムPCR法による検出プロトコールを確立し、子宮内感染症が疑われた臨床検体で検討した。羊水300検体での解析結果は、検出レベル（陽性と陰性）は、マイコプラズマが93.3％（280/300）、ウレアプラスマが94.3％（263/300）、他の細菌が89.3％（263/300）で培養結果と一致した。228検体はPCR法で陰性であり、224検体（224/228,98.2％）が培養検査でも陰性であった。以上より、PCRを基にした羊水検査は、マイコプラズマ、ウレアプラズマが培養法が困難で時間がかかることを考慮すれば、感染症を迅速に否定できるという利点が高い。４）一分子蛍光相関法による転写因子NF-kB活性化定量測定法に関してオリンパス社ＭＦ⒛機器を利用した解析プロトコールを構築し、膵臓手術等の大手術時におけるモニターとしての有用性のデータを蓄積している。

Research Products

• [Journal Article] Post-maketing surveillance of thrombomodulin alfa, a novel drug for treatment of disseminated intravascular coagulation treatment- Safety and efficacy in 1,032 patients assosiated with hematologic malignancy (2014)
  • Author(s): Asakura H, Takahashi H, Matsushita T, Ninomya H, Honda G, Mimuro J, Eguchi Y, Kitajima I, Sakata Y
  • Journal Title: Thromｂ Res. Volume: 133 Pages: 364-370
  • DOI: doi:10.1016/j.thromres2013.12.033
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Thrombomodulin alfa treatment in patients with acute promyelocytic leukemia and disseminated intravascular coagulation: a retrospective analysis of a open label multicenter postmarketing surveillance study cohort. (2014)
  • Author(s): Mastusita T, Watanabe J, Honda G, Mimuro J, Tsuji H, Eguchi Y, Kitajima I, Sakata Y
  • Journal Title: Thromb Res. Volume: 133 Pages: 772-781
  • DOI: doi:10.1186/2052-0492-230.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Post-marketing surveillance data of the thrombomodulin alfa: sub-analysis in patients with sepsis-induced disseminated intravascular coagulation. (2014)
  • Author(s): Eguchi Y, Gando S, Ishikura H, Saitoh D, Mimuro J, Takahashi H, Kitajima I, Tshuji H, Matsushita T, Tsujita R, Nagao O, Sakata Y
  • Journal Title: Journal of Intensive Care. Volume: 2 Pages: 30
  • DOI: doi:10.1186/2052-0492-230.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] Tm mapping法（感染症起炎菌迅速同定法）の院内試験運用とその評価 (2014)
  • Author(s): 仁井見英樹、上野智浩、森正之、多葉田誉、南洋、杉江和茂、齋藤滋、北島勲
  • Organizer: 第61回日本臨床検査医学会学術集会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 2014-11-20 – 2014-11-23
• [Presentation] 感染症起炎菌迅速同定法(Tm mapping法)の学内試験運用における正確性の評価 (2014)
  • Author(s): 仁井見英樹、上野智浩、森正之、杉江和茂、北島勲
  • Organizer: 第54回日本臨床化学会年次学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2014-09-03 – 2014-09-05
• [Presentation] The Tm mapping method. A noel rapid, easy, and cost-effective method that identifies unknown pathogenic microorganisms within 3 hours of patietnt sample collection. (2014)
  • Author(s): Niimi H, Kitajima I
  • Organizer: Microbiology and Infectious Diseases Asia Congress. 2014
  • Place of Presentation: シンガポール
  • Year and Date: 2014-06-10 – 2014-06-11
  • Invited
• [Presentation] A Novel Method That Enables Rapid Identification of Unknown Pathogenic Bacteria In Sepsis Within Three Hours of Whole Blood Collection. (2014)
  • Author(s): Niimi H, Ueno T, Hayashi S, Abe A, Tsurue T, Mori M, Tabata H, Minami H, Goto M, Saito S and Kitajima I. The Melting Temperature (Tm) Mapping Method:
  • Organizer: ECCMID 2014
  • Place of Presentation: バルセロナ
  • Year and Date: 2014-05-10 – 2014-05-13
• [Presentation] I: The Melting Temperature (TM) Mapping Method: A Novel Method That Enables Rapid Identification of Unknown Pathogenic Microorganisms within Three Hours of Patient Sample Collection. (2014)
  • Author(s): Niimi H, Ueno T, Kitajima Ｉ．
  • Organizer: The 9th International Conference of Clinical Laboratory Automation and Robotics
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2014-04-17 – 2014-04-19