肝幹細胞分化を基軸としたＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡの完全排除を目指す新規治療の創成

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25670366
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 朝比奈 靖浩 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 寄附講座教授 (00422692)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 柿沼 晴 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 寄附講座講師 (30372444) ; 中川 美奈 東京医科歯科大学, 医歯学融合教育支援センター, 准教授 (30401342)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: cccDNA / 幹細胞分化 / HBV / iPS細胞

Research Abstract

1．細胞分化度を調節可能な、ヒトiPS細胞由来肝幹・前駆細胞および成熟肝細胞の誘導・培養系の確立：細胞分化度の変化がHBV感染サイクルに与える影響を解析するために、ヒトiPS細胞にActivin A, FGF, HGFを段階的に添加し肝細胞系への分化誘導を行った。肝幹細胞マーカーCD13, CD133陽性細胞をFACSで分離し、ヒトiPS細胞由来肝幹・前駆細胞のより効率的な純化・培養法を開発した。またOSM・細胞外マトリクス等の刺激により成熟肝細胞への分化が誘導された細胞の培養法を構築している。
2．細胞分化度を調節し得る細胞培養系におけるHBV増殖系の構築と細胞分化度の変化がHBVライフサイクルに与える影響の解析： 本研究に使用するHBV増殖細胞モデルとしては、わが国に多く存在するHBVゲノタイプB、C株及び本来欧米に多いが近年わが国で蔓延兆候のあるゲノタイプA株の1.24倍長ゲノムをクローン化した感染粒子形成可能なプラスミドを作成した。成熟肝細胞への分化が誘導された細胞におけるHBV及びHCVのレセプター発現を解析し、通常の肝癌細胞株における発現より高発現であることを確認した。現在プラスミドを導入しウイルス蛋白の発現解析を遂行中である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

細胞分化度を調節可能な、ヒトiPS細胞由来肝幹・前駆細胞および成熟肝細胞の誘導・培養系の確立は改良の余地があるが、おおむね順調に進捗している。

Strategy for Future Research Activity

現在得ている成熟肝細胞のHBV、HCVレセプターの発現は通常用いる肝癌細胞株よりは高発現であるものの、感染系を確立するためには十分ではない。従って転写因子を強制発現させるなど、より成熟肝細胞へ分化した細胞培養系の構築を行っているところである。これら及び異なる分化度の細胞において、HBVプラスミドの強制導入と感染実験により、細胞分化度の違いがHBVライフサイクルに与える影響を解析し、治療標的としての意義を検討する。また、より簡便にHBV感染系の評価を可能とするためにレポーター蛋白および蛍光色素遺伝子を内包したHBVコンストラクトを入手し使用する方針である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

試薬等が計画当初より廉価で購入可能であったため。
検討する数・種類を拡大して解析を行うため、試薬を増量して購入する予定である。

Research Products

• [Journal Article] α-fetoprotein levels after interferon therapy and risk of hepatocarcinogenesis in chronic hepatitis C. (2013)
  • Author(s): Asahina Y, Tsuchiya K, Nishimura T, Muraoka M, Suzuki Y, Tamaki N, Yasui Y, Hosokawa T, Ueda K, Nakanishi H, Itakura J, Takahashi Y, Kurosaki M, Enomoto N, Nakagawa M, Kakinuma S, Watanabe M, Izumi N
  • Journal Title: Hepatology Volume: 58 Pages: 1253-1262
  • DOI: 10.1002/hep.26442
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Guidelines for the Management of Hepatitis C Virus Infection. (2013)
  • Author(s): Asahina Y, Hayashi N, Izumi N, Koike K, Kumada H, Oketani M, Suzuki F, Takikawa H, Tanaka A, Tsubouchi H, Yotsuyanagi H: editors of the Drafting Committee for Hepatitis Management Guidelines
  • Journal Title: Hepatol Res Volume: 43 Pages: 1-34
  • DOI: 10.1111/hepr.12020
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Inhibition of hepatocellular carcinoma by PegIFNα-2a in patients with chronic hepatitis C: a nationwide multicenter cooperative study. (2013)
  • Author(s): Izumi N, Asahina Y, Kurosaki M, Yamada G, Kawai T, Kajiwara E, Okamura Y, Takeuchi T, Yokosuka O, Kariyama K, Toyoda J, Inao M, Tanaka E, Moriwaki H, Adachi H, Katsushima S, Kudo M, Takaguchi K, Hiasa Y, Chayama K, Yatsuhashi H, Oketani M, Kumada H
  • Journal Title: J Gastroenterol Volume: 48 Pages: 382-390
  • DOI: 10.1007/s00535-012-0641-9
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hepatitis C virus NS4B protein targets STING and abrogates RIG-I-mediated type I interferon-dependent innate immunity. (2013)
  • Author(s): Nitta S, Sakamoto N, Nakagawa M, Kakinuma S, Mishima K, Kusano-Kitazume A, Kiyohashi K, Murakawa M, Nishimura-Sakurai Y, Azuma S, Tasaka-Fujita M, Asahina Y, Yoneyama M, Fujita T, Watanabe M
  • Journal Title: Hepatology Volume: 57 Pages: 46-58
  • DOI: 10.1002/hep.26017
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Wnt5a signaling mediates biliary differentiation of fetal hepatic stem/progenitor cells in mice. (2013)
  • Author(s): Kiyohashi K, Kakinuma S, Kamiya A, Sakamoto N, Nitta S, Yamanaka H, Yoshino K, Fujiki J, Murakawa M, Kusano-Kitazume A, Shimizu H, Okamoto R, Azuma S, Nakagawa M, Asahina Y, Tanimizu N, Kikuchi A, Nakauchi H, Watanabe M
  • Journal Title: Hepatology Volume: 57 Pages: 2502-25013
  • DOI: 10.1002/hep.26293
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Clinical characteristics of patients who developed hepatocellular carcinoma after hepatitis C virus eradication with interferon therapy: current status in Japan. (2013)
  • Author(s): Sato A, Sata M, Ikeda K, Kumada T, Izumi N, Asahina Y, Osaki Y, Chayama K, Kaneko S, Sakai A, Onji M, Hiasa Y, Omura T, Ozeki I, Yokosuka O, Shiina S, Itsubo M, Nishiguchi S, Hirano K, Ide T, Sakisaka S, Yamasaki T, Hidaka I, Tanaka M, Kim SR, Ichida T
  • Journal Title: Intern Med Volume: 52 Pages: 2701-2706
  • DOI: 10.2169/internalmedicine.52.1180
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Impaired IL28B gene induction and expression of IFNλ4 are closely associated with a non-response to interferon-based therapy in chronic hepatitis C patients. (2013)
  • Author(s): Asahina Y, Murakawa M, NittaS, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Kakinuma S, Watanabe M
  • Organizer: The 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Disease (AASLD The Liver Meeting 2013)
  • Place of Presentation: Washington DC(USA)
  • Year and Date: 20131105-20131105
• [Presentation] Substitution of amino acid 70/91 in the hepatitis C virus core region affects infectious virus production and cell surface expression of MHC class I. (2013)
  • Author(s): Tasaka-Fujita M, Sugiyama N, Kang W, Murayama A, Asahina Y, Sakamoto N, Wakita T, Shin EC, Kato T
  • Organizer: The 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Disease (AASLD The Liver Meeting 2013)
  • Place of Presentation: Washington DC(USA)
  • Year and Date: 20131101-20131105
• [Presentation] Serum interleukin-6 levels during treatment correlate with resistance to telaprevir-based triple therapy in chronic hepatitis C (2013)
  • Author(s): Asahina Y, Nakagawa M, Taniguchi M, Kawai F, Fujiki J, Otani T, Yamanaka H, Murakawa M, Nitta S, Kitazume A, Watanabe T, Sakurai Y, Azuma S, Kakinuma S, Watanabe M
  • Organizer: The 48th annual meeting of the European association for the study of the liver (EASL The International Liver Congress 2013)
  • Place of Presentation: Amusterdam(Netherlands)
  • Year and Date: 20130424-20130428