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2014 Fiscal Year Research-status Report

iPS細胞とRNAiを用いた新規解析戦略の確立とそれを用いたHTT遺伝子機能探索

Research Project

Project/Area Number 25670428
Research InstitutionNational Center of Neurology and Psychiatry

Principal Investigator

北條 浩彦  独立行政法人国立精神・神経医療研究センター, 神経研究所 神経薬理研究部, 室長 (60238722)

Project Period (FY) 2013-04-01 – 2016-03-31
KeywordsRNAi / ハンチントン病 / ハンチンチン遺伝子 / アデノ随伴ウイルス / 多能性幹細胞
Outline of Annual Research Achievements

ハンチンチン(HTT)遺伝子のノックアウトマウスは8.5日胚までに胚性致死となるが、そのHTT遺伝子の胚発生過程における役割や細胞内での機能については全くわかっていない。本研究は、多能性幹細胞(ES細胞、iPS細胞)とRNAiノックダウン法を組合せた全く新しいアプローチによって今までわからなかったHTT遺伝子の胚発生過程の役割や細胞内機能の解明の突破口となる新規データの取得を目的とする。
本年度は、前年度までに構築したshRNA発現ベクターからアデノ随伴ウイルス(AAV)へのパッケージングと精製作業を行い、得られたshRNA発現AAVを用いて内在性Htt遺伝子発現抑制効果の確認を行った。多能性幹細胞の培養に関しては、培養技術の習得と練習を兼ねて先ずはマウスES細胞の培養を行いiPS細胞培養に向けての準備を行った。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

shRNA発現AAVの構築は完了することができた。多能性幹細胞の培養に関してはiPS細胞よりも比較的培養が安定しているマウスES細胞を用いて先ずは培養技術の習得を行った。

Strategy for Future Research Activity

Htt遺伝子の発現抑制方法について、当初の計画ではRNAi技術を使って遺伝子ノックダウンすることを考えていたが、最近のCRISP/Cas9システムの実用性の向上と高い成功率を考えると、RNAiシステムよりもCRISP/Cas9システムを使って遺伝子ノックアウトした方がよいと考えている。来年度はその点を含めて検討していきたいと考えている。

  • Research Products

    (11 results)

All 2015 2014

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 1 results,  Acknowledgement Compliant: 2 results) Presentation (7 results) (of which Invited: 1 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Gene silencing mediated by endogenous microRNAs under heat stress conditions in mammalian cells.2014

    • Author(s)
      Fukuoka M., Yoshida M., Eda A., Takahashi M., *Hohjoh H.
    • Journal Title

      PLoS ONE

      Volume: 9(7) Pages: e103130.

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0103130. eCollection 2014.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] A novel measurement of allele discrimination for assessment of allele-specific silencing by RNA interference.2014

    • Author(s)
      Takahashi M. and *Hohjoh H.
    • Journal Title

      Mol Biol Rep

      Volume: 41 Pages: 7115-7120

    • DOI

      10.1007/s11033-014-3586-7. Epub 2014 Jul 19.

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Disease-associated mutations of TDP-43 promote turnover of the protein through the proteasomal pathway.2014

    • Author(s)
      Araki W., Minegishi S., Motoki K., Kume H., Hohjoh H., Araki YM., and Tamaoka A.
    • Journal Title

      Mol Neurobiol

      Volume: 50 Pages: 1049-1058

    • DOI

      10.1007/s12035-014-8644-6. Epub 2014 Jan 30.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Long-term clinical outcome of SCA8 in Japanese.2015

    • Author(s)
      Furuya H, Arahata H, Watanabe A, Ohyagi Y, Hohjoh H, Maeda N, Iwaki T, and Fujii N.
    • Organizer
      8th International Conference on Unstable Microsatellites and Human Disease
    • Place of Presentation
      Guanancaste, Costa Rica
    • Year and Date
      2015-01-17
  • [Presentation] 熱ストレス下におけるマイクロRNAの遺伝子発現制御に関する解析2014

    • Author(s)
      福岡聖之、吉田満史子、枝亜希子、高橋理貴、北條浩彦.
    • Organizer
      第37回日本分子生物学会大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(横浜)
    • Year and Date
      2014-11-26
  • [Presentation] 老化モデルマウスおよび正常加齢マウスにおけるmiR-29の発現上昇とそれに伴うコラーゲンタイプIVの発現低下2014

    • Author(s)
      北條浩彦、高橋理貴、枝亜希子、福島達伸
    • Organizer
      第59回日本人類遺伝学会大会
    • Place of Presentation
      タワーホール船堀(東京)
    • Year and Date
      2014-11-21
  • [Presentation] Application of atypical RNAi for human diseases.2014

    • Author(s)
      Takahashi M, Nakamura Y, and Hohjoh H.
    • Organizer
      Joint Australia and Japan RNA (jajRNA) meeting
    • Place of Presentation
      Sydney, Australia
    • Year and Date
      2014-11-03
  • [Presentation] Gene silencing mediated by endogenous miRNAs under heat stress conditions in mammalian cells.2014

    • Author(s)
      Fukuoka M, Yoshida M, Eda A, Takahashi M, and Hohjoh H.
    • Organizer
      64rd Annual Meeting of the American Society of Human Genetics
    • Place of Presentation
      San Diego Convention Center, San Diego, CA, USA
    • Year and Date
      2014-10-20
  • [Presentation] Early drug responses that are followed by an acquired drug resistance in non-small cell lung cancer cells exposed to gefitinib.2014

    • Author(s)
      Takahashi M, Fukuoka M, and Hohjoh H.
    • Organizer
      64rd Annual Meeting of the American Society of Human Genetics
    • Place of Presentation
      San Diego Convention Center, San Diego, CA, USA
    • Year and Date
      2014-10-19
  • [Presentation] デジタルPCRを利用した新しい研究の可能性2014

    • Author(s)
      北條浩彦
    • Organizer
      ライフテクノロジーズ・オンラインセミナー
    • Place of Presentation
      ライフテクノロジーズジャパン株式会社本社、東京
    • Year and Date
      2014-05-29
    • Invited
  • [Book] 医学のあゆみ2014

    • Author(s)
      北條浩彦
    • Total Pages
      1
    • Publisher
      医歯薬出版株式会社

URL: 

Published: 2016-05-27  

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