2014 Fiscal Year Annual Research Report
AIRE研究を基盤とした新たな自己抗原(DI)に対する自己抗体の臨床的意義
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25670461
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
永淵 正法 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00150441)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 自己免疫調節遺伝子 / Disulfide Isomerase / 自己抗体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【方法】患者血清を用いた大規模スクリーニングを実施。作成したDisulfide Isomerase (DI)抗原を10ng/lane用い、10%ポリアクリルアミドゲルのSDS-PAGEを実施。さらに、PVDF膜へ転写し、これに一次抗体として、患者プール血清を用いて反応させた。この際、1検体あたりの血清量は5μlとし、各疾患毎にプール血清を作成。その後、希釈倍率を合わせた（1検体あたり×400希釈相当）。なお、この時の疾患群として、自己免疫性膵炎、ブドウ膜炎、慢性胃炎（抗胃壁細胞抗体+）、慢性胃炎、GVHD、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、橋本病を合計200例程度選択した。二次抗体には、Amersham ECL Anti-Human IgG, Horse radish peroxidase-linked species-specific whole Antibodyを×10,000希釈にて使用した。
【結果】今回の実験条件では、スクリーニングは全例陰性という結果となった。用いた一次抗体がプール血清の状態であるため、一次抗体としての血清量（もしくは抗体力価）が不足、もしくは抗原としてのDI量が不足が考えられる。対処策としては、これらのWestern blottingの条件設定の改善もしくは、Dot Blot法へスクリーニング方法を変更することも検討すべきだと考えられる。さらにこの結果をうけて、高感度検出法であるELISAの検査系確立の重要性が認識されたため、この検査系の開発に取り組んでいる。
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[Journal Article] Reduced Tyk2 gene expression in β-cells due to natural mutation determines susceptibility to virus-induced diabetes.2015
Author(s)
Izumi K, Mine K, Inoue Y, Teshima M, Ogawa S, Kai K, Kurafuji T, Hirakawa K, Miyakawa D, Ikeda H, Inada A, Hara M, Yamada H, Akashi K, Niho Y, Ina K, Kobayashi T, Yoshikai Y, Anzai K, Yamashita T, Minagawa H, Fujimoto S, Kurisaki H, Shimoda K, Katsuta H, Nagafuchi S.
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Journal Title
Nature Communications
Volume: 6
Pages: e6748,
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Suppression of Th1-mediated autoimmunity by embryonic stem cell-derived dendritic cells.2014
Author(s)
Ikeda T, Hirata S, Takamatsu K, Haruta M, Tsukamoto H, Ito T, Uchino M, Ando Y, Nagafuchi S, Nishimura Y, Senju S.
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Journal Title
PLos One
Volume: 9
Pages: e115198
DOI
Peer Reviewed / Open Access
