2014 Fiscal Year Research-status Report
定量的タンパク質発現解析を利用したミクロ解剖学アトラスの開発
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25670750
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
橋川 和信 神戸大学, 医学部附属病院, 准教授 (90403237)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野村 正 神戸大学, 医学部附属病院, 講師 (30529566)
高須 啓之 神戸大学, 医学部附属病院, 助教 (40566022)
榊原 俊介 神戸大学, 医学部附属病院, 助教 (50444592)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 顔面神経 / HN-1 / 神経再生 / 神経損傷 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題では、末梢神経や脳神経の損傷時に細胞体内において発現がup-regurateされるタンパク質のうち、特にHN-1タンパク質に注目し、脳神経損傷後の発現量のup-regurationを検出することで中枢神経系におけるミクロな解剖学的アトラスを作成することを目的としている。特に顔面神経核をモデルとし、各枝を個々に切断したのち、神経核内でのHN-1タンパク質のup-regurationされている領域を画像化および再構築することを目指している。昨年度までにHN-1タンパク質をコードするcDNAの断片をRT-PCRによりクローニングし、これをプラスミドに組み込むことまでを行った。本年度は、これを逆転写し、in situハイブリダイゼーション用のcRNAを作成し、Digoxigeninの系によりin situハイブリダイゼーションを行い、HN-1の検出を行うことを試みた。まず、正常ラット（なにも損傷させていない）での脳切片を作成し、in situハイブリダイゼーションを行ったところ、微弱なシグナルが一部において認められたが、左右差が認められず、ポジティブコントロールとはならなかった。次に片側の顔面神経本幹を切断したのち約5日で抜脳、in situハイブリダイゼーションを行ったところ、一部切片ではシグナルが検出された一方で、不安定な検出であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
in situハイブリダイゼーションの系は不安定ながらも立ち上がりつつあるため、当該評価とした。
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| Strategy for Future Research Activity |
in situハイブリダイゼーションの実験系はまだ安定していないため、まずは系の安定を試みる。安定した時点で順次、神経の枝を切断し、mappingを行う予定である。同時に抗体の検索を行い、同様の実験を免疫組織学的に行う予定である。
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| Causes of Carryover |
実験動物を他の研究課題と共有したこと等により差額が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
試薬購入や実験動物の購入、画像解析ソフトの購入などを行う。
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