2013 Fiscal Year Research-status Report
新たなリプログラミング法による組織幹細胞作製技術の開発
| Project/Area Number |
25670818
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
|
| Research Institution | Okayama University |
|---|
Principal Investigator |
窪木 拓男 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (00225195)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
園山 亘 岡山大学, 大学病院, 講師 (40325121)
大野 充昭 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (60613156)
秋山 謙太郎 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (70423291)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
|
| Keywords | microRNA / リプログラミング / side population / 間葉系幹細胞 |
|---|
| Research Abstract |
本研究では，細胞性質決定因子である転写因子およびmicroRNAに注目し，それらを応用した歯原性組織前駆細胞から未分化組織幹細胞を作製する，新しいリプログラミング法の開発と最適化を行なうことを目的に計画された．
平成26年度は，ヒト抜去歯より歯髄細胞および歯根膜細胞を分離した．また，未分化間葉系幹細胞には特異的マーカーは存在しないが，これら未分化間葉系幹細胞はABCG2トランスポーターの機能が高く，Hoechstにて染色し， Hoechst Blueとred にてドットプロットを行うと，Main population (MP) 分画と異なる部位に分布する (side population （SP）分画)ことが知られている．そこで，歯髄および歯根膜より採取した間葉系細胞をHoechstにて染色し，FACS AriaにてSP細胞を分離した．次に，分離したSP細胞およびMP細胞の機能解析を行なった．その結果，SP細胞群はMP細胞群と比べ，ABCG2トランスポーター，幹細胞のマーカーの一つであるOct4, Nanogの発現量が有意に高かった．また，colony forming unit-fibroblast (CFU-F) assayにてコロニー形成能を比較検討した結果，SP細胞群はMP細胞群と比べコロニー形成能が高い事が明らかとなった．つまり，これらの結果から，MP細胞群と比べSP細胞群に未分化間葉系幹細胞が多数含まれる事が明らかとなった．次に，MP細胞群に高発現するmiRNAを網羅的に検索するため，miRNA Arrayを行い，miR720を含むいくつかのmicroRNAが間葉系幹細胞の未分化維持に関わっていることを突き詰めた．
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
すでに我々のグループは，未分化維持に関わっているmicroRNAを幾つか発見することに成功しており，当初の計画以上に研究が進行していると考えられる．
|
| Strategy for Future Research Activity |
来年度は，これらのmicroRNAの生理的機能を明らかにするため，in vitroにて実験を実施する予定である．また，一つのmicroRNAが様々な遺伝子をターゲットにすることが知られており，我々はin silico解析の結果，我々が発見したmicroRNAはエピゲノムを制御している因子の発現をコントロールしていることを突き詰めている．
今後は，その因子が間葉系幹細胞の身分化維持に関わっているかを明らかにしていく予定である．
|
-
[Journal Article] miRNA-720 controls stem cell phenotype, proliferation and differentiation of human dental pulp cells2013
Author(s)
Hara ES, Ono M, Eguchi T, Kubota S, Pham HT, Sonoyama W, Tajima S, Takigawa M, Calderwood SK, Kuboki T.
-
Journal Title
PLoS One
Volume: 8(12)
Pages: e83545
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
