2014 Fiscal Year Annual Research Report
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25750396
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
二村 友史 独立行政法人理化学研究所, 長田抗生物質研究室, 訪問研究員 (70525857)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | ケミカルバイオロジー / モルフォベース |
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| Outline of Annual Research Achievements |
私はがん細胞が与えられた薬剤の作用に応じて特異な形態を示すことに着目し、ユニークな生理活性を示す化合物（バイオプローブ）を発掘する探索基盤として細胞形態変化データベース「モルフォベース」を用いたハイコンテントスクリーニング法を開発してきた。本研究では、モルフォベースに照合されない特異な表現型を示すオイデスマン化合物の標的タンパク質を同定し、がん分子標的薬開発における魅力的なドラッガブルターゲットの提示を目的とした。
オイデスマン化合物は、sNRK細胞の巨大化を誘導し、HeLa細胞に対して顕著なG2/M期停止を誘導する。
この化合物の細胞内標的分子標的を見出すため、ケムプロテオベースによる作用予測を試みた。その結果、高いスコアで分類される標的は見つからず、わずかにプロテアソーム阻害剤との類似性が見られた。プロテアソームを阻害するかをin vitro、細胞レベルで確認したところ、酵素阻害活性や細胞内ユビキチン化タンパク質の蓄積は観察されず、本化合物はプロテアソームを阻害しないことが示唆された。
次に化合物固定化ビーズを用いたアフィニティー精製を試みた。まず固定化に必須なUV照射に対する安定性を確認したところ、この化合物はUVに不安定ではないことがわかった。次に作製した化合物固定化ビーズを用いて細胞抽出液より結合タンパク質を探索した。様々なアフィニティー精製の条件検討を行ったが、特異的な結合タンパク質の発見には至らなかった。
一方、オイデスマン化合物はG2/M期停止を誘導したことから細胞分裂に与える影響を免疫染色法で検討した。その結果、本化合物は紡錘体形成や染色体凝集に影響を与えず、細胞周期を停止させることが明らかになった。
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