2014 Fiscal Year Annual Research Report
核磁気共鳴法による巨大蛋白質多量体の動態解析法の開発
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25840021
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
宮ノ入 洋平 名古屋大学, 理学(系)研究科(研究院), 特任助教 (80547521)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | NMR / 蛋白質動態 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成26年度においては、まずGroEL-ES複合体について、PheおよびMet残基由来のシグナルを帰属するため、一塩基置換変異体の作製を進めた。これにより、Metε位の13C, 1Hシグナルの帰属を進める事が出来た。興味深い点として、315番目のMet残基(M315)と542番目のMet残基(M542)は、GroEL-ES複合体において、それぞれが２つのNMRシグナルを示している事が明らかとなった。これはM315とM542が、GroEL-ES複合体において異なる２つの状態を呈していることを示している。これまでに、GroEL-ES複合体の結晶構造が明らかにされており、M315はGroESとGroELとの相互作用界面に、M542はGroELのC末端領域に存在しており、GroEL14量体の相互作用面に存在している。結晶構造からは、両Met残基について異なる状態を示す知見は得られておらず、GroEL-ES複合体において、機能発現に関わる動態解明に近づくと期待された。温度可変実験等を進め、シグナル変化の解析を試みたが、交換速度の解明には至らなかった。今後、圧力変化の解析などを検討する。また、Met残基のみならず、Ile, Val, Leu等のメチル基のシグナル解析についても最適化を進め、GroEL-ES複合体の動態解明を目指す。
一方、芳香族アミノ酸についても、13C-1HシグナルがGroEL-ES複合体においても、培養条件や、安定同位体標識法を最適化することにより、高感度に観測できることが明らかとなった。特に、Tyr残基の芳香環CHシグナルはアミノ酸置換法により、一義的に帰属する事が出来た。
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[Journal Article] Expression and purification of a GRAS domain of SLR1, the rice DELLA protein.2014
Author(s)
Sato T, Miyanoiri Y, Takeda M, Naoe Y, Mitani R, Hirano K, Takehara S, Kainosho M, Matsuoka M, Ueguchi-Tanaka M, Kato H
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Journal Title
Protein Expr Purif.
Volume: 95
Pages: 248-258
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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