精子形成細胞の分化研究を明らかにする免疫電顕クロマトイドミクス解析

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25840119
• Research Institution: Nagasaki International University
• Principal Investigator: 藤井 佑樹 長崎国際大学, 薬学部, 助教 (80610063)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: Argonaute-2 / 精子形成 / RNA誘導型サイレンシング複合体 / ヌアージュ

Outline of Annual Research Achievements

正常な遺伝子を保護し異常なmRNAを切断する、RNA型サイレンシング複合体の主要成分、Argonaute-2（Ago2）タンパク質の精子細胞分化過程での発現を観察した。抗ラットAgo2ポリクローナル抗体を用いて精巣の超微形態観察を行うと、Ago2は精母細胞のステージVIIIでヌアージュ構造であるLoose aggregate Structure に発現を認めた。分化が進行したステージXでは、Intermitochondrial cementにAgo2の発現が移行することが判明した。精子細胞に分化後は、Ago2はステップ1から6でクロマトイドボディーに局在し、それ以上の分化段階で、Ago2が消失していくことを明らかにできた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

抗Ago2抗血清の作製に成功し、ラット精巣内の精母細胞・精子細胞でのAgo2の発現時期を見出すことが出来た。

Strategy for Future Research Activity

配偶子細胞で健常なmRNAを維持するしくみを明らかにするため、Ago2に加えて、他のRNA型サイレンシング複合体の成分解明に取り組む。抗Ago2抗体を利用し、RNA型サイレンシング複合体分子を共精製する条件の検討を行う。複合体を構成する分子が精製できたら、その分子の同定を行い、抗体を作製し、電顕による発現の観察に役立てる。

Causes of Carryover

電顕用の包埋試薬の輸入による入荷の遅れから、前年度内に購入することが困難であったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

電顕用の包埋樹脂の条件検討を行いながら、ラット精巣内のAgo2とその関連分子の発現を観察する。

Research Products

• [Journal Article] Expression of various types of glycans in the lugworm (Perinereis nuntia var. vallata) (2015)
  • Author(s): Koide Y, Hasan I, Asanuma A, Fujii Y, Ogawa Y, Kobayashi H, Rajia S, Kawsar SMA, Kanaly RA, Ozeki Y.
  • Journal Title: Annals of Marine Biology and Research Volume: ２ Pages: 1005
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] A Galactose-Binding Lectin Isolated from Aplysia kurodai (Sea Hare) Eggs Inhibits Streptolysin-Induced Hemolysis. (2014)
  • Author(s): Hasan I., Watanabe M, Ishizaki N., Sugita-Konishi Y., Kawakami Y, Suzuki J., Dogasaki C., Rajia S., Kawsar S.M.A., Koide Y., Kanaly R.A., Sugawara S., Hosono M., Ogawa Y., Fujii Y., Iriko H., Hamako J., Matsui T., Ozeki Y
  • Journal Title: Molecules Volume: 19 Pages: 13990-14003
  • DOI: 10.3390/molecules190913990
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Inulavosin and its benzo-derivatives, melanogenesis inhibitors, target the copper loading mechanism to the active site of tyrosinase. (2014)
  • Author(s): Fujita H., Menezes J.C., Santos S.M., Yokota S., Kamat S.P., Cavaleiro J.A., Motokawa T., Kato T., Mochizuki M., Fujiwara T., Fujii Y., Tanaka Y.
  • Journal Title: Pigment Cell Melanoma Res. Volume: 27 Pages: 376-386
  • DOI: 10.1111/pcmr.12225.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Sialyl-glycoconjugates in cholesterol-rich microdomains of P388 cells are the triggers for apoptosis induced by Rana catesbeiana oocyte ribonuclease. (2014)
  • Author(s): Ogawa Y., Sugawara S., Tatsuta T., Hosono M., Nitta K., Fujii Y., Kobayashi H., Fujimura T., Taka H., Koide Y., Hasan I., Matsumoto R., Yasumitsu H., Kanaly R.A., Kawsar S.M.A., Ozeki Y.
  • Journal Title: Glycoconj J Volume: 31 Pages: 171-184
  • DOI: 10.1007/s10719-013-9513-7
  • Peer Reviewed
• [Presentation] The molecular morphology of the cytotoxic retrotranslocation by an N-acetylhexosamine-binding lectin isolated from slipper lobster in breast and ovarian cancer cells. (2014)
  • Author(s): Fujii Y., Fujiwara T., Ogawa Y., Sugawara S., Hosono M., Hasan I., Koide Y., Kawsar S.M.A., Ozeki Y., Fujita H.
  • Organizer: Joint Meeting of the Society for Glycobiology (SFG) and the Japanese Society of Carbohydrate Research (JSCR), 米国糖鎖生物学会、日本糖質学会合同会議
  • Place of Presentation: 米国、ハワイ州、ホノルル市
  • Year and Date: 2014-11-16 – 2014-11-19
• [Presentation] A sialic acid-binding lectin (SBL)-dependent apoptosis is triggered by sialylated-glycoconjugates in GEM of P388 cells (2014)
  • Author(s): Ogawa Y., Fujii Y., Sugawara S.,Hosono M., Takeo T., Nitta K., Koide Y., Hasan I., Kawsar S.M.A., Kobayashi H., Ozeki Y.
  • Organizer: Joint Meeting of the Society for Glycobiology (SFG) and the Japanese Society of Carbohydrate Research (JSCR), 米国糖鎖生物学会、日本糖質学会合同会議
  • Place of Presentation: 米国、ハワイ州、ホノルル市
  • Year and Date: 2014-11-16 – 2014-11-19
• [Presentation] Intracellular trafficking of Mytilec, a Gb3-specific R-type mussel lectin with cytotoxic activity (2014)
  • Author(s): Hasan I., Fujii Y., Ogawa Y., Sugawara S., Hosono M., Koide Y., Rajia S., Kawsar S.M.A., Kanaly R.A., Fujiwara T., Fujita H., Ozeki Y.
  • Organizer: Joint Meeting of the Society for Glycobiology (SFG) and the Japanese Society of Carbohydrate Research (JSCR), 米国糖鎖生物学会、日本糖質学会合同会議
  • Place of Presentation: 米国、ハワイ州、ホノルル市
  • Year and Date: 2014-11-16 – 2014-11-19
• [Presentation] Inulavosin and its benzo-derivatives affect on copper-loading mechanism to tyrosinase, a key enzyme of melanin synthesis in melanocytes. (2014)
  • Author(s): Fujita H., Menezes J, Santos S.M., Yokota S, Kamat S.P., Cavaleiro J.A.S, Motokawa T., Kato Tomomi, Mochizuki M., Fujii Y., Fujiwara T.
  • Organizer: XXII International Pigment Cell Conference (IPCC2014)
  • Place of Presentation: シンガポール
  • Year and Date: 2014-09-04 – 2014-09-07