2014 Fiscal Year Research-status Report
PPARγリガンドのアロステリックリン酸化阻害機構の解明に関する研究
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25860090
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| Research Institution | Showa Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
伊藤 俊将 昭和薬科大学, 薬学部, 講師 (80536110)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | PPAR / X線結晶構造解析 / タンパク質NMR / 構造生物学 / インスリン抵抗性改善作用 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
PPARγは２型糖尿病治療薬の標的分子である。近年，PPARγリガンドによるインスリン抵抗性改善作用はPPARγのリガンドがPPARγのSer245を阻害することと関連付けられた。本研究はPPARγに与える影響すなわち力どのような経路でSer245の振る舞いに影響を与えるのかを解明するための研究課題である。
当該年度は，前年度に行った，X－線結晶構造解析，アポPPARγのNMR実験を基に，リガンドによる影響の検討と変異実験を組み合わせて行った。その結果，Ser245リン酸化機構の鍵になるアミノ酸残基を見出すことができた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の当該年度の計画は
点変異で得られたタンパク質を発現、精製後、リン酸化阻害実験， X-線結晶構造解析を行う。変異体の NMR 実験を種々のリガンドと組み合わせて検討する。野生型でリガンド結合に影響されるアミノ酸残基の うち、変異体で影響されなくなったアミノ酸残基が、シグナル伝播経路を特定する鍵となる。それぞれの実験データを in silico 上で解析し、解析データを基にシグナル伝播経路を推定する。この結果から、重要と思われるアミノ酸残基との接触を避けたリガ ンドを合成する予定であった。この内点変異で得られた変異体タンパク質の発現精製はできた。一方で，研究協力者担当のリン酸化阻害実験は成功していない。しかし，NMR実験と点変異実験，CDスペクトルを用いた熱変異実験により，各アミノ酸の役割を実験結果から推定することができた。以上のことから，概ね順調と考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
上記年度で得られた伝播経路を確認する実験を行う。溶液散乱実験を野生型/変異体およびリガンド有/無に関して行いの全体構造の変化を捉える。これは Ser245 はタンパク質表面にあり、結晶構造解析は表面構造の解析には向いていないためである。これまでの実験のデータを統合し、シグナル伝播経路を決定する。時間的に余裕はないと思うができれば、情報を基にリード化合物を設計し合成したいと考えている。
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| Causes of Carryover |
次の実験に使用する試薬が 8,412円 より高額であり，進捗状況は良好であることもあり,購入を次年度に見送ることにした。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
還元剤の購入を検討している。理由は，タンパク質の安定化に不可欠であるためである。
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Research Products
(3 results)
