2013 Fiscal Year Research-status Report
脂質異常症治療薬エゼチミブによるコレステロール吸収トランスポーター阻害機構の解明
Project/Area Number |
25860132
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Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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Research Institution | Fukuyama University |
Principal Investigator |
上敷領 淳 福山大学, 薬学部, 講師 (80600121)
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Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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Keywords | コレステロール / NPC1L1 / エゼチミブ |
Research Abstract |
本研究では、コレステロールトランスポーターNPC1L1に関して、そのコレステロール吸収機構およびコレステロール吸収阻害剤エゼチミブの作用機構の解明を目的としている。これまでの研究では、N末端球状ドメインへのコレステロールの結合や第2細胞外ループ領域へのエゼチミブの結合は明らかになっているが、それらがどのようにしてコレステロールの吸収、または、コレステロール吸収阻害に至るかの機構解明には至っていない。 本研究では、NPC1L1のドメイン間相互作用に着目して研究を進めている。エゼチミブが効果を示さない変異体(V55L)を持つ人がいることが知られているが、エゼチミブが結合するドメインとは別のドメインに存在する変異がどのようにしてエゼチミブの効果を打ち消すのかは不明である。 本研究では、これまでにNPC1L1のV55L変異体を作製し、V55L変異体を安定に発現する細胞株の樹立を行った。また、NPC1L1においてコレステロールが結合するN末端球状ドメインをNPC1L1のホモログであるNPC1のN末端球状ドメインに置換した変異体の作製も行い、その安定発現株の樹立も行った。その他の実績としては、N末端球状ドメインへのコレステロールの結合活性をRIラベルしたコレステロールを用いて解析する手法を確立した。また、NPC1L1に緑色蛍光タンパク質(GFP)を融合させたNPC1L1を用いて、コレステロール投与によるNPC1L1の細胞内局在変化およびエゼチミブによる吸収阻害効果を細胞を用いてアッセイする系の確立を行った。さらに、アッセイ系を確立する過程でNPC1L1がコレステロール以外の基質に対しても作用することを細胞レベルで明らかにすることができた。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
コレステロールトランスポーターNPC1L1は、これまでの研究から、1)N末端の球状ドメインにコレステロールが結合すること、2)コレステロール吸収阻害剤エゼチミブはN末端球状ドメインとは別の細胞外ドメインに結合し、阻害活性を示すことが明らかになっている。しかし、NPC1L1へのコレステロールの結合から細胞内に取り込まれる機構およびエゼチミブによってコレステロール吸収が阻害される機構に関しては不明である。そこで、本研究では、NPC1L1のコレステロール吸収機構、また、エゼチミブによる吸収阻害機構に関して、NPC1L1のドメイン間相互作用に着目して研究を行っている。現在までに、エゼチミブが効果を示さない変異体(V55L)の作製が完了している。また、N末端球状ドメインをNPC1L1のホモログであるNPC1のN末端球状ドメインに置換した変異体の作製も完了している。
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Strategy for Future Research Activity |
これまでに、コレステロール吸収阻害剤のエゼチミブが効果を示さない変異体(V55L)の作製が完了している。また、コレステロール結合活性が確認されているN末端球状ドメインをNPC1L1のホモログであるNPC1のN末端球状ドメインと置換した変異体の作製も完了している。そこで、両変異体において、コレステロール吸収活性にどのような影響が現れるか細胞を用いた解析を行う。併せて、エゼチミブ投与時にコレステロール吸収阻害が起こるか否かの解析を行う。両変異体ともエゼチミブが結合するドメインとは別のN末端球状ドメインの変異体であるので、エゼチミブの作用に対する影響を確かめることができれば、コレステロール吸収機構およびエゼチミブの作用機構に関する新たな知見となる。
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Research Products
(3 results)