2013 Fiscal Year Research-status Report

骨格筋細胞の分化におけるノンコーディングRNAの機能解析と治療への応用

Research Project

Project/Area Number	25860151
Research Category	Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
Research Institution	Fujita Health University
Principal Investigator	常陸圭介藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助教 (10508469)
Project Period (FY)	2013-04-01 – 2016-03-31
Keywords	ノンコーディングRNA / 細胞分化
Research Abstract	我々はこれまでに、筋分化に伴い発現が変化する複数の新規非コードRNAを同定している。本研究では、我々が同定した非コードRNAの骨格筋細胞の分化における役割を明らかにするとともに、非コードRNAを利用して骨格筋細胞を作り出す手法を開発することを目的とする。本年度は、C2C12 細胞の筋分化過程において、我々が同定した5種類のマイクロRNAの機能阻害を行ない、miR-191の機能阻害により筋分化が遅延する事が明らかとなった。このため、miR-191は筋分化に必須である事がわかった。さらに本年度は、Myogenin遺伝子由来の非コードRNAの機能阻害方法の検討を行った。その結果、siRNAを利用する事で高効率で非コードRNAの発現を抑制する事が可能であることが明らかとなった。また、この非コードRNAの遺伝子構造を明らかにするために5’RACEと3’RACEを行い、非コードRNAの全長配列を決定した。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 本年度は研究計画に従い、我々が同定したマイクロRNAの一つであるmiR-191がC2C12細胞の筋分化に必須である事を明らかにした。Myogenin遺伝子由来の非コードRNAについては、siRNAを用いる事で、効率的に発現を抑制する手法を確立した。また、RACEを行いこの非コードRNAの全長を決定した。このため、現在まで研究計画に従い研究はおおむね順調に進展していると考えられる。
Strategy for Future Research Activity	本年度で筋分化にmiR-191が必須である事が明らかとなったため、次年度以降では筋分化におけるmiR-191の機能を生化学的に解析し、miR-191の標的となる遺伝子の特定を目指す。また、本年度でMyogenin遺伝子由来の非コードRNAを機能阻害するための方法が確立できたため、次年度はこの手法を用いて実際に非コードRNAの機能を阻害し筋分化への影響を分子生物学的により詳細に解析する。また、これらの非コードRNAを利用して、筋分化を促進する事が可能であるかを検討する。
Expenditure Plans for the Next FY Research Funding	本年度は計画していた研究が順調に進展したため、若干の研究費の繰越金が発生した。次年度は、我々が同定した非コードRNAの機能を解析するため、生化学的・分子生物学的な試薬と細胞培養に必要な試薬の購入が必要である。また、研究計画に従い、in vivo での筋分化にMyogenin由来の非コードRNAが関与しているかを明らかにするために、マウスの購入が必要である。そのため、研究費はこれらの用途に使用する。