ES細胞におけるMax非結合型c-Mycによるアポトーシス誘導機構の解明

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25860244
• Research Institution: Saitama Medical University
• Principal Investigator: 平崎 正孝 埼玉医科大学, 医学部, 助教 (10522154)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: ES細胞

Outline of Annual Research Achievements

転写因子c-Mycと因子Aが相互作用する事は、HEK293細胞での共免疫沈降によって見出していた。そこで、本申請において、ES細胞を用い内在性のc-Mycと因子Aが、相互作用を示すかを調べた。その結果、因子Aは、c-MycとのみならずN-Mycとも相互作用を示す事が見出された。c-, N-MycはMaxと複合体を形成する事で機能するが、因子Aとの相互作用は、Max非依存的であった。
因子Aがc-Mycのどの領域に結合しているかを調べる為に、HA tagged c-Myc deletion formが挿入されているプラスミドベクターを作成した。そのHA-c-Myc deletionベクターとFlag-因子AをHEK293細胞へ共導入し、共免疫沈降によって結合の有無を調べた。その結果、因子Aは、c-MycのN末端に結合している事が見いだされた。
非ステロイド性の抗エストロゲン剤であるタモキシフェンで活性が調節できるc-MycERをES細胞へ導入し、安定株を樹立した。その細胞株にタモキシフェンを添加すると、劇的な細胞死を示し、アポトーシスを起こしている事が見いだされた。しかし、その細胞死はN末端を欠失させると抑制された。
c-Mycが因子Aのどの領域に結合しているかを調べたる為に、Flag tagged 因子A deletion formが挿入されているプラスミドベクターを作成した。HA-c-Myc ベクターとFlag-因子A　deletionベクターをHEK293細胞へ共導入し、共免疫沈降によって結合の有無を調べた。しかし、明確に結合領域を決定する事は出来なかった。

Research Products

• [Journal Article] Functional compensation between Myc and PI3K signaling supports self-renewal of embryonic stem cells. (2015)
  • Author(s): Hishida T, Nakachi Y, Mizuno Y, Katano M, Okazaki Y, Ema M, Takahashi S, Hirasaki M, Suzuki A, Ueda A, Nishimoto M, Hishida-Nozaki Y, Vazquez-Ferrer E, Sancho-Martinez I, Izpisua Belmonte JC, Okuda A.
  • Journal Title: Stem cells Volume: 33 Pages: 713-725
  • DOI: 10.1002/stem.1893.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The protein phosphatase Siw14 controls caffeine-induced nuclear localization and phosphorylation of Gln3 via the type 2A protein phosphatases Pph21 and Pph22 in Saccharomyces cerevisiae. (2015)
  • Author(s): Numamoto M, Sasano Y, Hirasaki M, Sugiyama M, Maekawa H, Harashima S.
  • Journal Title: J. Biochem. Volume: 157 Pages: 53-64
  • DOI: doi: 10.1093/jb/mvu055.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Forced expression of nanog or esrrb preserves the esc status in the absence of nucleostemin expression. (2015)
  • Author(s): Katano M, Ema M, Nakachi Y, Mizuno Y, Hirasaki M, Suzuki A, Ueda A, Nishimoto M, Takahashi S, Okazaki Y, Okuda A.
  • Journal Title: Stem cells Volume: 33 Pages: 1089-1101
  • DOI: 10.1002/stem.1918.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Identification of ccr4-not complex components as regulators of transition from partial to genuine induced pluripotent stem cells. (2014)
  • Author(s): Kamon M, Katano M, Hiraki-Kamon K, Hishida T, Nakachi Y, Mizuno Y, Okazaki Y, Suzuki A, Hirasaki M, Ueda A, Nishimoto M, Kato H, Okuda A.
  • Journal Title: Stem Cells Dev. Volume: 15 Pages: 2170-2179
  • DOI: 10.1089/scd.2013.0326.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Does Nanog neutralize the apoptosis-promoting activity of c-Myc liberated from Max control? (2014)
  • Author(s): Masataka Hirasaki, Atsushi Ueda, Miyuki Katano, Ayumu Suzuki, Masazumi Nishimoto, Akihiko Okuda
  • Organizer: 第12回RCGMフロンティアシンポジウム
  • Place of Presentation: 埼玉県日高市・埼玉医科大学 30周年記念講堂
  • Year and Date: 2014-10-31 – 2014-11-01
• [Presentation] Nanog は、Max非結合型Mycによるアポトーシスを抑圧するか？ (2014)
  • Author(s): 平崎 正孝、上田 篤、 片野 幸、 鈴木 歩、 西本 正純、 奥田 晶彦
  • Organizer: 4.「人工多能性幹細胞（iPS 細胞）作製・制御等の医療基盤技術」研究領域 平成２６年度領域ミーティング
  • Place of Presentation: 兵庫県淡路島市・兵庫県立淡路夢舞台国際会議場
  • Year and Date: 2014-10-28 – 2014-10-29