C型肝炎を正常化するHCV非構造蛋白質発現組換えワクチニアウイルスの作用機序解明

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25860305
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
• Principal Investigator: 大槻 貴博 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 研究員 (10593642)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: マクロファージ / HCV / C型慢性肝炎 / 組換えワクシニアウイルス / 治療ワクチン

Outline of Annual Research Achievements

C型慢性肝炎の病態の進行にはマクロファージが深く関与するがC型慢性肝炎の病態を解析するためのモデル動物がいないためあまり解析されていない。申請者らはpolyIC投与により任意の時期に慢性C型肝炎を呈するモデルマウスを作製し解析を行った。このマウスでは、血清中の炎症性サイトカイン（IL-6, TNFα）が上昇して主にIL-6, TNFαを産生する炎症性M2マクロファージ（M2Mφ）が肝臓で増加していた。このマウスにHCV非構造蛋白質発現組換えワクシニアウイルス（rVV-N25）を作製し接種したところ、接種1週間で肝臓の病態は正常化し、血清中のサイトカインは正常レベルに低下した。さらにFACS解析により肝臓内の炎症性M2Mφ数が減少していることが分かった。次にrVV-N25の作用機序について、接種後いつから、どの段階で、どのように炎症性M2Mφを減少させるかについて解析を試みた。はじめにrVV-N25接種により肝臓内M2Mφの多臓器のへの移動について解析した。慢性C型肝炎を呈するモデルマウスにrVV-N25を接種し、1週後に採材したところ、肝臓は正常化しており血清中のIL-6, TNFαが低下していた。FACS解析したところ、肝臓および脾臓に存在していたIL-6, TNFα産生M2Mφは減少し、脂肪組織で増加していた。M2MφマーカーのCD206、F4/80陽性細胞を肝臓および脂肪組織で免疫染色したところ、FACSの結果同様に肝臓では減少し、脂肪組織では増加していた。rVV-N25は肝臓内のIL-6, TNFα産生 M2Mφ減少させることで炎症性サイトカインを減少し、C型慢性肝炎を正常化させる事が示唆されたがその機序については不明である。そこでrVV-N25接種後の炎症性M2Mφの体内動態解析を行った。C型慢性肝炎モデルマウス脾臓からCD11b陽性細胞を分離しFITC 標識F4/80抗体で染色後にC型慢性肝炎モデルマウスに移入したところ肝臓でFITC陽性M2Mφが検出された。今後rVV-N25接種により経時的に体内動態解析をFACSにより解析を行う。

Research Products

• [Journal Article] CKR-L3, a deletion version CCR6-isoform shows coreceptor-activity for limited human and simian immunodeficiency viruses. (2014)
  • Author(s): Islam S, Kanbe K, Shimizu N, Ohtsuki T, Jinno-Oue A, Tanaka A, Hoshino H.
  • Journal Title: BMC Infect Dis. Volume: 14 Pages: 354
  • DOI: 10.1186/1471-2334-14-354.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] In vivo therapeutic potential of Dicer-hunting siRNAs targeting infectious hepatitis C virus. (2014)
  • Author(s): Watanabe T, Hatakeyama H, Matsuda-Yasui C, Sato Y, Sudoh M, Takagi A, Hirata Y, Ohtsuki T, Arai M, Inoue K, Harashima H, Kohara M.
  • Journal Title: Sci Rep. Volume: 4 Pages: 4750
  • DOI: 10.1038/srep04750.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] 選択的Wnt/β-catenin/CBPシグナル阻害剤による肝線維症改善作用 (2014)
  • Author(s): 徳永 優子、木村 公則、大槻 貴博、林 幸子、原 詳子、宗片 圭祐、比島 恒和、小嶋 聡一、小原 道法
  • Organizer: 第62回日本ウイルス学会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜, 神奈川
  • Year and Date: 2014-11-10 – 2014-11-12
• [Presentation] Selective inhibitor of Wnt/β-catenin/CBP signaling ameliorates hepatitis C virus-induced liver fibrosis (2014)
  • Author(s): Yuko Tokunaga, Kiminori Kimura, Takahiro Ohtsuki, Yukiko Hayashi, Mitsuko Hara, Keisuke Munekata, Tsunekazu Hishima, Hiroyuki Kouji, Soichi Kojima, Michinori Kohara
  • Organizer: 21th International symposium on Hepatitis C Virus and Related viruses
  • Place of Presentation: Banff, Canada
  • Year and Date: 2014-09-07 – 2014-09-11
• [Remarks] 東京都医学総合研究所感染制御プロジェクト
  • URL: http://www.igakuken.or.jp/infectious/index.html