HCVキメラウイルス感染培養系を用いた薬剤耐性機序の解析

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25860513
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 須田 剛生 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), その他 (20447460)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: HCV / 薬剤耐性ウイルス

Outline of Annual Research Achievements

１）我々が樹立した新規長期培養ウイルスにIFNを加え共培養を行ったところIFN耐性ウイルスを単離した。その、ＩＦＮ抵抗性を有するウイルスのシークエンスを行い構造遺伝子(E1およびE2)アミノ酸置間を伴う変異を二カ所認めた。その変異を親株のウイルスに導入しＨuh751細胞に導入しＩＦＮ抵抗性の検討を行ったところ、親株と比較してＩＦＮ抵抗性となる事が確認されＩＦＮ抵抗性を有するＨＣＶ株の樹立に成功した。現在、変異をいれたエンベロープ蛋白の恒常発現細胞を構築しＩＦＮ抵抗性となる詳細な機序の検討を行っている。
２）つい最近、慢性C型肝炎に対する主流はウイルスの蛋白を直接にターゲットとしたＤＡＡと呼ばれる薬剤が使用されている。高い治療効果が認められるが、薬剤耐性ウイルスが大きな問題となっている。そこで、我々の研究室で保有する次世代シークエンサー(ION PGM System, Life Technologies)を用いてDAA治療前後の患者血清を使用し解析を行った。ＤＡＡ治療失敗例においては、高率に耐性ウイルスが出現する事、ＩＦＮと併用療法であれば検討した症例においては治療前のプロテアーゼ阻害剤耐性ウイルスは治療効果に影響を与えない事を明らかにした。臨床検体から同定した薬剤耐性変異を我々が構築したHCVクローンに導入し検討を行ったところ、fitnessが低下する事、ＩＦＮに対しては親株と同等の感受性を有する事を明らかにした。

Research Products

• [Journal Article] EGFR inhibitors eliminate cancer stem-like cells in esophageal squamous cell carcinoma by suppressing epithelial-mesenchymal transition (2015)
  • Author(s): １．Fumiyuki Sato, Yoshimasa Kubota, Mitsuteru Natsuizaka, Osamu Maehara, Yutaka Hatanaka, Katsuji Marukawa, Katsumi Terashita, Goki Suda, Shunsuke Ohnishi, Yuichi Shimizu, Yoshito Komatsu, Shinya Ohashi, Shingo Kagawa, Hideaki Kinugasa, Kelly Whelan, Anil Rustgi, Hiroshi Nakagawa, and Naoya Sakamoto
  • Journal Title: Cancer Biology & Therapy Volume: Epub ahead of print Pages: ahead of print
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Human amnion-derived mesenchymeal stem cell transplantation ameliorates dextran sulfate sodium-induced severe colitis in rats. (2015)
  • Author(s): ２．Onishi R, Ohnishi S, Higashi R, Watari M, Yamahara K, Okubo N, Nakagawa K, Katsurada T, Suda G, Natsuizaka M, Takeda H, Sakamoto N
  • Journal Title: Cell Transplantation Volume: Epub ahead of print Pages: ahead of print
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Intratumoral artery on contrast-enhanced computed tomography imaging: differentiating intrahepatic cholangiocarcinoma from poorly differentiated hepatocellular carcinoma (2015)
  • Author(s): ３．Tsunematsu S1, Chuma M, Kamiyama T, Miyamoto N, Yabusaki S, Hatanaka K, Mitsuhashi T, Kamachi H, Yokoo H, Kakisaka T, Tsuruga Y, Orimo T, Wakayama K, Ito J, Sato F, Terashita K, Nakai M, Tsukuda Y, Sho T, Suda G, Morikawa K, Natsuizaka M, Nakanishi M, Ogawa K, Taketomi A, Matsuno Y, Sakamoto N
  • Journal Title: Abdom Imaging. Volume: Epub ahead of print Pages: ahead of print
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Serum granulysin levels as a predictor of serious telaprevir-induced dermatological reactions (2015)
  • Author(s): Goki Suda, Yoshiya Yamamoto, Astushi Nagasaka, Ken Furuya, Mineo Kudo, Chuganji Yoshimichi Mitsuteru Natsuizka, Kouji Ogawa, Shunsuke Ohnishi, Makoto Chuma, Yasuyuki Fujita, Riichiro Abe, Miki Taniguchi, Mina Nakagawa, Yasuhiro Asahina, and Naoya Sakamoto et al
  • Journal Title: Hepatology Res Volume: Epub ahead of print Pages: ahead of print
  • DOI: 10.1111/hepr.12421
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Heat shock factor 1 accelerates hepatocellular carcinoma development by activating nuclear factor κB/mitogen-activated protein kinase (2014)
  • Author(s): ５．Chuma M, Sakamoto N, Nakai A, Hige S, Nakanishi M, Natsuizaka M, Suda G, Sho T, Hatanaka K, Matsuno Y, Yokoo H, Kamiyama T, Taketomi A, Fujii G, Tashiro K, Hikiba Y, Fujimoto M, Asaka M, Maeda S
  • Journal Title: Carcinogenesis Volume: 35(2) Pages: 272-281
  • DOI: 10.1093/carcin/bgt343
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hepatosplenic Gamma-delta T-cell Lymphoma Associated with Epstein-Barr Virus (2014)
  • Author(s): ６．Seiji Tsunematsu, Mitsuteru Natsuizaka, Hiromi Fujita, Noriyuki Otsuka, Katsumi Terashita, Fumiyuki Sato, Tomoe Kobayashi, Masato Nakai, Yoko Tsukuda, Hiromasa Horimoto, Takuya Sho, Goki Suda, Mitsuru Nakanishi, Satoshi Hashino, Makoto Chuma, Naoya Sakamoto
  • Journal Title: Intern Med Volume: 53(18) Pages: 2079-2082
  • Peer Reviewed
• [Presentation] DAA併用療法におけるDAA耐性ウイルス/治療予測因子の検討 (2014)
  • Author(s): 須田剛生 古家乾 坂本直哉
  • Organizer: 肝臓病学会東部会
  • Place of Presentation: 京王プラザホテル （東京 新宿）
  • Year and Date: 2014-11-29 – 2014-11-29
• [Presentation] Ｃ型肝炎は完治できる時代へ (2014)
  • Author(s): 須田剛生
  • Organizer: 日本臨床検査医学学術集会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場 （福岡県 博多）
  • Year and Date: 2014-11-24 – 2014-11-24
• [Presentation] Serum granulysin levels as a predictor of serious telaprevir-induced dermatological reaction (2014)
  • Author(s): Goki Suda1 ,Yoko Tsukuda1, Seiji Tsunematsu1, Fumiyuki Satou1, Katsumi Terasita1, Takuya Sho 1, Masato Nakai1, Mitsuteru Natsuizka1, Makoto Chuma 1, Naoya Sakamoto
  • Organizer: 65th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
  • Place of Presentation: Boston (USA)
  • Year and Date: 2014-11-09 – 2014-11-09
• [Presentation] Analysis of First and Second Generation Protease Inhibitor Combination Therapy in Patients with Chronic Hepatitis C Virus Infection (2014)
  • Author(s): 須田剛生 永坂敦 坂本直哉
  • Organizer: 日本消化器病関連学会週間
  • Place of Presentation: 神戸国際展示場 （兵庫県 神戸）
  • Year and Date: 2014-10-23 – 2014-10-23
• [Presentation] C型慢性肝炎に対するDAA療法の治療予測因子・薬剤耐性ウイルスの検討 (2014)
  • Author(s): 須田剛生 中馬 誠 坂本直哉
  • Organizer: 肝臓病学会総会
  • Place of Presentation: ホテルニューオータニ （東京都 千代田区)
  • Year and Date: 2014-05-29 – 2014-05-29
• [Presentation] プロテアーゼ阻害剤併用療法の治療予測因子・薬剤耐性ウイルスの検討 (2014)
  • Author(s): 須田剛生 中馬 誠 坂本直哉
  • Organizer: 消化器病学会総会
  • Place of Presentation: 東京国際フォーラム (東京都 千代田区）
  • Year and Date: 2014-04-24 – 2014-04-24