2013 Fiscal Year Research-status Report
ALS 罹患組織における GEM小体減少機序の検討
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25860703
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Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
石原 智彦 新潟大学, 脳研究所, 助教 (70612232)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | ALS / TDP-43 / snRNAs / GEM body / SMN |
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| Research Abstract |
本研究は筋萎縮性側索硬化症（ALS）の病態機序解明を目的とする．我々はALS罹患組織におけるRNA代謝の異常に注目し，mRNAのスプライシングに関連するsmall nuclear RNAs (snRNAs)が低下する事，およびsnRNAsの成熟に重要な核内小体，GEM小体がALS患者組織にて低下している事を既に見出している．本研究の目的はGEM小体減少の具体的機序を明らかにし，ALS病態生理の解明を進めることである.我々は平成25年度に培養細胞およびALS罹患組織にてGEM小体関連蛋白の定量を行ったのでこれを報告する．
siRNA法によるTDP-43発現抑制Hela細胞にてウェスタンブロット法，逆転写定量PCR法により解析を行った．逆転写定量PCR法の条件設定は国際的な実験ガイドラインに準じた．使用するRNAの品質は，バイオアナライザー2100を用いて確認し，内在性コントロールの設定に当たっては15種類の候補遺伝子の発現を計測し，内在性コントロール選定ソフト GeNorm を用いて設定した．その結果，複数種類のsiRNA プローブによるTDP-43発現抑制細胞それぞれで，GEM小体の主要構成蛋白質であるSMNおよび Gemin 3,6,8 蛋白質の発現低下を認めた．またSMN mRNAの発現量低下を認めた．これらの結果からは，TDP-43機能低下はSMN蛋白質の発現低下を介して，GEM小体数を低下させることが予想された．しかしALS罹患組織である脊髄，大脳皮質運動野での解析では，SMN mRNAは対照群と比較して有意な減少を呈さなかった．ALS罹患組織におけるGEM小体数の低下は，SMN蛋白の直接的な低下のみでは説明が困難である．これに関しては我々は核内でのGEM小体の形成，安定化にTDP-43蛋白質が寄与する可能性を考えている．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初計画した予定に準じ，GEM小体関連蛋白質およびmRNAの発現定量を行えている．
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| Strategy for Future Research Activity |
我々はGEM小体，snRNAsの低下によりmRNAのスプライシング変化が生じ，運動神経細胞死が引き起こされることを想定している．ALS患者組織にて，その病態に関与する遺伝子の同定とスプライシング変化を定量していく．
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Research Products
(5 results)
