2014 Fiscal Year Annual Research Report
ALS 罹患組織における GEM小体減少機序の検討
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25860703
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
石原 智彦 新潟大学, 脳研究所, 助教 (70612232)
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2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | ALS / TDP-43 / U snRNAs / GEM / SMN |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は筋萎縮性側索硬化症の病態機序解明を目的とする．我々はALS罹患組織におけるRNA代謝の異常に注目し，既にALS罹患組織において，mRNAのスプライシングに関与する U snRNAsが低下すること，および U snRNAsの成熟に重要なGEM小体が減少することを見出している．本研究の目的はGEM小体減少の具体的機序およびsnRNAの低下による罹患組織でのmRNA代謝異常を明らかにすることである．
本研究では培養細胞およびALS罹患組織においてGEM小体関連蛋白の定量を行った．siRNA法によるTDP-43発現抑制培養細胞にて，逆転写定量PCR法にてmRNAの測定を，ウェスタンブロット法にて蛋白質の定量を行った．その結果，複数種類のsiRNAプローブによるTDP-43発現抑制細胞にて，GEM小体の主要構成蛋白質であるSMNのmRNAおよび蛋白質の低下を認めた．しかしALS罹患組織ではSMN mRNAの低下は認めなかった．ALS罹患組織におけるGEM小体数の低下は，SMN蛋白質の直接的な低下のみでは説明が困難である．これに関しては我々は核内でのGEM小体の形成，安定化にTDP-43蛋白質が寄与する可能性を考えている．
またTDP-43 発現低下培養細胞およびALS 罹患組織におけるスプライシング異常の検討を行った．特にALS罹患組織で低下のみられる，minor spliceosome に属する U snRNA 依存性のsplicing異常に注目をし，逆転写PCRにて解析を行った．その結果，IPO-4，IFT80など複数のmRNAでのsplicing異常を認めた．これらの単独，あるいは複数のスプライシング異常がALSの原因となりうるのかについては確定的でない．この点を明らかにするために，運動神経選択的なmRNA発現解析やモデル動物の作成などが，今後の課題として挙げられる．
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Research Products
(4 results)
