2014 Fiscal Year Research-status Report
複合型下垂体機能低下症における新規原因遺伝子の同定
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25860871
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
伊達木 澄人 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (70462801)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 小児内分泌学 / 下垂体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（1) 検体集積：両親の検体が使用可能な３症例（症例１：12歳女児、症例２：15歳男児、症例３：1歳男児において、以下の解析をおこなった。
(２) エクソーム解析：３症例とその両親において、末梢白血球から通常の方法でｹﾞﾉﾑDNAを採取し、次世代ｼｰｸｴﾝｻｰ(SOLiD 5500, Life Technologies)を用いて、全遺伝子のｴｸｿﾝ領域の配列を決定した。
De novo候補変異数は3症例ともに平均で約30万だったが、その後，missense, nonsense, frameshift, splice変異を抽出し，データベースを用いて候補変異を抽出，最終的には直接シーケンス法で確認したところ，de novo変異コール数は家系1が4遺伝子の4変異（CDK13, MYOD1, SPATA13, XYLT），家系2が1遺伝子1変異（TUBGCP3）を同定した。常染色体劣性遺伝形式をとるホモ変異は、家系1では1遺伝子1変異（SMARCA2），家系2では3遺伝子3変異(TSPAN2, YEATS2, SYNM)，家系3ではいとこ婚であることを反映してか，9遺伝子9変異を認めた(PKN2, MAGI1, ROBO1, KHDC1L, CCDC91, HNF1A, CYP1A2, TTLL12, RP1-32I10.10)。複合ヘテロ変異3症例ともに同定されなかった。
(３) ゲノムコピー数解析：エクソーム解析では解析できないコピー数の異常検出するため、array CGH、SNP array解析を行った。上記症例１ではHTR1Fを含む3p11.2領域の微小ヘテロ欠失を同定した。これは表現型正常である父にも同定されたため、病的意義は低いと考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
我々はすでに、原因不明の先天性複合型下垂体機能低下症患者３症例とその両親においてトリオ・エクソーム解析を行った。そこから得られるデータは膨大なものであり、そのデータの処理と解析・検討に時間を要した。以上より、当初の目標としていた研究進行状況には若干の遅れが生じているが、今後、発現解析や他症例での同遺伝子の変異解析を進める準備はできており、今後進展するものと思われる。
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| Strategy for Future Research Activity |
今まで施行した３家系のトリオ・エクソーム解析の結果から、上記の複合型下垂体機能低下症の新規原因遺伝子候補を同定した。
今後は、１．cDNAライブラリーを用いた発現解析における下垂体、視床下部での発現の確認 ２. 他の複合型下垂体機能低下症患者における変異、欠失解析 ３.In vitro機能解析 を行い、これらの遺伝子が複合型下垂体機能低下症の真の原因遺伝子がどうかを検討する。
また、新規下垂体機能低下症患者がいる場合には、トリオ・エクソーム解析を継続する。複合型下垂体機能低下症の臨床像は様々である。ある特異的な症状、ホルモン障害パターンを有する群に特異的な遺伝子異常症がないか、多症例で検討したい。
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| Causes of Carryover |
H26年度は、次世代シークエンスを用いたエクソーム解析を行うための、患者、家系の選別、既知遺伝子異常症の除外を主に行った。そのため、H26年度未使用額は、これらの家系のエクソーム解析と候補遺伝子の検索、解析、さらには新規患者の解析のため、H27年度に使用する予定である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
H26年度未使用額は以下の研究費を使用予定である。
エクソーム関連試薬：100万円 ゲノムコピー数解析関連試薬：50万円 遺伝子発現解析のためのヒトcDNAライブラリー購入：40万円 分子生化学関連試薬：35万円 実験補助人件費：40万円 成果発表旅費、論文別刷：30万円 ディスポーザルプラスチック器具：5万円 通信費：5千円
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